多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida, P.multocida）是有莢膜的革蘭氏陰性菌,該菌能引起禽霍亂、牛出血性敗血癥、豬肺疫、豬萎縮性鼻炎和兔出血性敗血癥等疾病,對(duì)動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)造成很大的損失,此菌也可以感染人類,但是死亡率很低。采用選擇性捕獲轉(zhuǎn)錄序列技術(shù)篩選到PrfA參與多殺性巴氏桿菌的感染,可能是細(xì)菌重要的毒力因子。 本研究利用PCR擴(kuò)增P.multocida C51-17株prfA基因的上、下游同源臂,將其克隆至質(zhì)粒pBC-SK相應(yīng)的酶切位點(diǎn),構(gòu)建重組質(zhì)粒pBC-prfASX;將卡那霉素抗性基因表達(dá)盒克隆prfA的上、下游同源臂之間,構(gòu)建自殺性質(zhì)粒pBC-ΔprfA。將pBC-Δ prfA電轉(zhuǎn)化至C51-17感受態(tài)細(xì)胞中,在抗性培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選,PCR和測(cè)序進(jìn)一步驗(yàn)證成功構(gòu)建了多殺性巴氏桿菌ΔprfA突變株。構(gòu)建的ΔprfA突變株,具有良好的遺傳穩(wěn)定性；ΔprfA突變株的生化特性未發(fā)生改變,與親本株一致。體外生長(zhǎng)曲線顯示,ΔprfA突變株和親本株在37℃時(shí)的生長(zhǎng)速度明顯高于42℃培養(yǎng)條件下,ΔprfA突變株在37℃和42℃時(shí)的增殖速度均快于親本株。在U... 

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 多殺性巴氏桿菌的流行病學(xué)及危害
        1.1.1 多殺性巴氏桿菌的流行特點(diǎn)
        1.1.2 多殺性巴氏桿菌的危害
    1.2 多殺性巴氏桿菌病的病原學(xué)
        1.2.1 多殺性巴氏桿菌的血清型分型
        1.2.2 多殺性巴氏桿菌的生長(zhǎng)特性與理化特性
    1.3 多殺性巴氏桿菌病的發(fā)病機(jī)理
    1.4 多殺性巴氏桿菌病的臨床癥狀
    1.5 多殺性巴氏桿菌的檢測(cè)方法
    1.6 多殺性巴氏桿菌的致病機(jī)制
    1.7 多殺性巴氏桿菌毒力因子
        1.7.1 莢膜
        1.7.2 外膜蛋白
        1.7.3 脂多糖
        1.7.4 皮膚壞死毒素
        1.7.5 菌毛和粘附素
        1.7.6 鐵捕獲蛋白
    1.8 多殺性巴氏桿菌的抗生素耐藥性
    1.9 PrfA的調(diào)控作用
    1.10 研究目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株、質(zhì)粒、細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 C51-17菌株基因組DNA的提取
        2.2.2 引物設(shè)計(jì)
        2.2.3 自殺性質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.4 C51-17菌株電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.5 自殺性質(zhì)粒的電轉(zhuǎn)化
        2.2.6 ΔprfA突變株的篩選及鑒定
        2.2.7 ΔprfA突變株的生物學(xué)特性鑒定
        2.2.8 ΔprfA突變株的致病性試驗(yàn)
        2.2.9 ΔprfA突變株粘附特性分析
        2.2.10 PrfA對(duì)Hpt、PM209、RpoH的調(diào)控作用
3 結(jié)果與分析
    3.1 prfA上下游同源臂的PCR擴(kuò)增結(jié)果
    3.2 自殺性質(zhì)粒的酶切鑒定結(jié)果
    3.3 ΔprfA突變株的PCR鑒定結(jié)果
    3.4 ΔprfA突變株的生物學(xué)特性測(cè)定結(jié)果
        3.4.1 生化特性檢測(cè)結(jié)果
        3.4.2 遺傳穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果
        3.4.3 生長(zhǎng)特性檢測(cè)結(jié)果
    3.5 ΔprfA突變株對(duì)小鼠的致病性結(jié)果
    3.6 ΔprfA突變株的粘附試驗(yàn)結(jié)果
    3.7 PrfA對(duì)Hpt、PM209、RpoH的調(diào)控結(jié)果
4 討論
    4.1 細(xì)菌基因突變策略
    4.2 PrfA調(diào)控作用
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]重組牛源莢膜A型多殺性巴氏桿菌脂蛋白E的免疫保護(hù)性研究[J]. 牛思博,姜志剛,德艷艷,于力.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(05)
[2]兔巴氏桿菌病的類型與防治措施[J]. 于艷霞,宋長(zhǎng)瑞,張新偉.  養(yǎng)殖技術(shù)顧問(wèn). 2012(12)
[3]動(dòng)物源多殺性巴氏桿菌耐藥性及耐藥機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 孔令聰,戰(zhàn)利,趙晴,高云航,馬紅霞.  中國(guó)獸藥雜志. 2012(03)
[4]單核細(xì)胞增生性李斯特菌prfA基因缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性[J]. 白春光,殷月蘭,賈艷艷,付紅,高云飛,焦新安.  微生物學(xué)報(bào). 2011(11)
[5]家兔巴氏桿菌病及其防治[J]. 馮小鹿.  農(nóng)村科學(xué)實(shí)驗(yàn). 2011(06)
[6]單核細(xì)胞增生李斯特菌SigmaB、PrfA因子對(duì)生物被膜形成影響的研究[J]. 張強(qiáng),馮飛飛,王莉,馮瑩穎,羅勤.  醫(yī)學(xué)研究雜志. 2010(10)
[7]腸炎沙門氏菌rpoH基因缺陷株的構(gòu)建及其熱激響應(yīng)特性[J]. 曾慶梅,張冬冬,韓抒,司文攻,李志強(qiáng),魏春燕,吳聰,靳靖.  食品科學(xué). 2009(11)
[8]細(xì)菌基因突變的策略及應(yīng)用[J]. 黃勇.  微生物學(xué)通報(bào). 2007(01)
[9]禽源多殺性巴氏桿菌（A:1）莢膜保護(hù)性抗原提純及單克隆抗體細(xì)胞系建立[J]. 步恒富,馬從林,劉■,鄧定華.  獸醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 1990(03)



本文編號(hào)：3695678