新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）是嚴重危害家禽業(yè)的重要傳染病病原,以高感染率和死亡率著稱,在世界范圍內(nèi)廣為流行。NDV能夠通過內(nèi)源性和外源性凋亡途徑誘導細胞死亡,具有溶瘤特性。線粒體是存在于真核生物中的一個雙層膜結構包裹的細胞器,在維持細胞穩(wěn)態(tài)過程中扮演著多種重要的角色。越來越多證據(jù)表明:線粒體在抗病毒免疫、細胞凋亡和炎癥等過程中發(fā)揮關鍵作用。NDV能夠通過各種手段逃逸宿主抗病毒免疫,在禽源細胞系和腫瘤細胞系中高效復制,誘導宿主細胞死亡。但線粒體作為維持細胞穩(wěn)態(tài)最重要的細胞器之一,在NDV感染細胞過程中發(fā)揮何種作用的研究較少。本研究通過透射電鏡（EM）、免疫熒光（IFA）、Western blotting（WB）和免疫共沉淀（Co-IP）等手段證實NDV擾亂線粒體的融合-分裂穩(wěn)態(tài),通過ParkinPINK1通路調(diào)控線粒體自噬過程降解損傷的片段化線粒體,最后闡明片段化線粒體的降解對抑制宿主抗病毒免疫具有重要的生物學意義。本研究中,主要研究內(nèi)容如下:1.觀察了NDV感染細胞擾亂線粒體融合-分裂穩(wěn)態(tài)。通過透射電鏡和免疫熒光等方法,證實NDV感染誘導明顯的線... 

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 細胞自噬簡述
        1.1.1 細胞自噬分類
        1.1.2 細胞自噬信號調(diào)控簡述
        1.1.3 選擇性自噬簡述
    1.2 病毒感染劫持細胞自噬簡述
        1.2.1 細胞自噬正向調(diào)控病毒感染
        1.2.2 細胞自噬負向調(diào)控病毒感染
    1.3 線粒體簡述
        1.3.1 線粒體結構和功能
        1.3.2 線粒體穩(wěn)態(tài)調(diào)控的分子動力學
        1.3.3 經(jīng)典線粒體自噬信號的調(diào)控簡述
    1.4 病毒感染劫持線粒體促進病毒復制機制
        1.4.1 病毒感染改變線粒體的空間分布,增強了線粒體的生物學功能
        1.4.2 病毒通過擾亂線粒體融合-分裂穩(wěn)態(tài)調(diào)控先天性免疫,促進病毒復制
        1.4.3 抑制了MAVS依賴的先天性免疫反應
        1.4.4 線粒體在病毒感染過程中的間接性作用
    1.5 溶瘤性病毒簡述
    1.6 本研究目的意義
第二章 新城疫病毒感染擾亂線粒體融合-分裂穩(wěn)態(tài)
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 細胞系、病毒和質(zhì)粒
        2.2.2 實驗試劑
    2.3 實驗方法
        2.3.1 轉(zhuǎn)染
        2.3.2 間接免疫熒光染色
        2.3.3 電鏡觀察
    2.4 結果
        2.4.1 新城疫病毒感染誘導細胞死亡和線粒體損傷
        2.4.2 新城疫病毒感染重塑線粒體的形態(tài)和誘導線粒體核周圍聚集
        2.4.3 新城疫病毒通過誘導線粒體核周圍聚集,增加線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)間的接觸互作
    2.5 本章討論
    2.6 本章小結
第三章 NDV感染通過自噬溶酶體和泛素蛋白酶體途徑調(diào)控線粒體的融合-分裂穩(wěn)態(tài)
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 細胞系、病毒和質(zhì)粒
        3.2.2 抗體和酶
    3.3 實驗方法
        3.3.1 轉(zhuǎn)染
        3.3.2 間接免疫熒光染色
        3.3.3 電鏡觀察
        3.3.4 免疫印跡
        3.3.5 相對熒光定量
    3.4 結果
        3.4.1 新城疫病毒感染早期誘導線粒體融合過程抑制線粒體的分裂過程
        3.4.2 新城疫病毒感染后期誘導線粒體的分裂過程抑制線粒體的融合過程
        3.4.3 新城疫病毒改變線粒體融合-分裂穩(wěn)態(tài)相關基因的mRNA水平
        3.4.4 新城疫病毒主要通過自噬溶酶體途徑降解線粒體的融合-分裂機器蛋白
    3.5 本章討論
    3.6 本章小結
第四章 NDV通過完全線粒體自噬途徑和內(nèi)體溶酶體途徑降解片段化線粒體
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 細胞系、病毒和質(zhì)粒
        4.2.2 抗體和藥物
    4.3 實驗方法
        4.3.1 轉(zhuǎn)染
        4.3.2 間接免疫熒光染色
        4.3.3 電鏡觀察
        4.3.4 免疫印跡
        4.3.5 ATP含量的檢測
    4.4 結果
        4.4.1 NDV感染晚期損壞線粒體的功能
        4.4.2 NDV感染晚期誘導線粒體自噬
        4.4.3 NDV感染晚期誘導完全的線粒體自噬
        4.4.4 內(nèi)體溶酶體途徑參與降解NDV感染誘導的片段化線粒體
    4.5 本章討論
    4.6 本章小結
第五章 新城疫病毒感染激活經(jīng)典的Parkin-PINK1 信號調(diào)控線粒體自噬過程
    5.1 引言
    5.2 實驗材料
        5.2.1 細胞系、病毒和質(zhì)粒
        5.2.2 抗體
    5.3 實驗方法
        5.3.1 轉(zhuǎn)染
        5.3.2 間接免疫熒光染色
        5.3.3 免疫印跡
        5.3.4 免疫共沉淀
    5.4 結果
        5.4.1 NDV感染激活經(jīng)典的Parkin-PINK1 線粒體自噬信號
        5.4.2 NDV感染能夠誘導MFN2 蛋白的泛素化
        5.4.3 接頭蛋白p62/SQSTM1和NDP52/CALCOCO2 蛋白參與到降解片段化的線粒體過程
        5.4.4 NDV感染通過降解片段化線粒體抑制MAVS依賴性先天性免疫反應
    5.5 本章討論
    5.6 本章小結
第六章 全文結論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡歷



本文編號：3694108