飽和脂肪酸含量的增加能引起哺乳動物肝細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激、炎癥、凋亡等反應,是導致脂肪肝病變的原因之一。硬脂酰輔酶A去飽和酶（SCD1）作為飽和脂肪酸去飽和的關(guān)鍵酶,在緩解脂肪肝病變中具有關(guān)鍵作用。SCD1在鵝中的表達豐度和基因組拷貝數(shù)顯著高于哺乳動物,推測SCD1在保護鵝肥肝脂肪代謝過程中發(fā)揮重要作用,然而,目前對SCD1在鵝肝飽和脂肪酸耐受性中的作用研究還未見報道。本研究利用不同濃度的棕櫚酸處理鵝肝細胞,并以人正常肝細胞系LO2細胞作為參照,通過MTT檢測鵝肝細胞對棕櫚酸的最大耐受濃度,利用熒光定量PCR（qPCR）對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激、炎癥、細胞凋亡相關(guān)基因表達量變化情況進行檢測,對鵝肝細胞的棕櫚酸耐受能力進行評價;同時干擾SCD1探究其在鵝肝細胞對棕櫚酸耐受中的作用及其作用途徑。主要研究結(jié)果如下:（1）鵝肝細胞對棕櫚酸的最大耐受濃度為0.6mM,而人肝細胞對棕櫚酸的最大耐受濃度低于0.2mM。（2）在0.6mM棕櫚酸處理下,鵝肝細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)基因（XBP、BIP、ATF6）、炎癥反應相關(guān)基因（IL-6、IL-1β、IFN-γ）、細胞凋亡相關(guān)基因（Bax、Bcl-2、Caspase-3... 

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
常用英文縮寫詞匯
前言
1 文獻綜述
    1.1 鵝肝臟脂肪變性特點
    1.2 肝臟脂肪代謝過程及其調(diào)控機制
        1.2.1 脂肪合成
        1.2.3 脂肪轉(zhuǎn)運
        1.2.4 脂肪酸氧化
        1.2.5 鵝肝臟脂肪代謝調(diào)控機制
    1.3 棕櫚酸與細胞脂毒性相關(guān)反應
        1.3.1 棕櫚酸與細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激
        1.3.2 棕櫚酸與細胞炎癥反應
        1.3.3 棕櫚酸與細胞凋亡
    1.4 SCD1在脂質(zhì)代謝及脂毒性相關(guān)反應中的作用
        1.4.1 SCD1概述
        1.4.2 SCD1在調(diào)控脂肪代謝中的作用
        1.4.3 SCD1在調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激中的作用
        1.4.4 SCD1在調(diào)控炎癥反應中的作用
        1.4.5 SCD1在調(diào)控細胞凋亡中的作用
    1.5 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗樣品
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 主要藥品和試劑
        2.1.4 主要試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 引物設(shè)計及合成
        2.2.2 細胞培養(yǎng)
        2.2.3 棕櫚酸處理細胞
        2.2.4 細胞轉(zhuǎn)染siRNA
        2.2.5 MTT檢測細胞活性
        2.2.6 油紅O染色
        2.2.7 總RNA提取及質(zhì)量檢測
        2.2.8 反轉(zhuǎn)錄反應
        2.2.9 熒光定量PCR
        2.2.10 TUNEL檢測細胞凋亡
        2.2.11 細胞色素c免疫熒光
        2.2.12 DAPI染色
    2.3 實驗數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 鵝肝細胞對棕櫚酸的耐受性評價
        3.1.1 棕櫚酸對細胞活性的影響
        3.1.2 棕櫚酸對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激基因表達的影響
        3.1.3 棕櫚酸對炎癥因子表達的影響
        3.1.4 棕櫚酸對細胞凋亡基因表達的影響
        3.1.5 棕櫚酸對脂肪酸去飽和過程中相關(guān)因子的影響
    3.2 鵝SCD1基因siRNA載體的篩選
        3.2.1 siRNA的設(shè)計與合成
        3.2.2 最佳siRNA序列篩選
    3.3 干擾SCD1對鵝肝細胞棕櫚酸耐受性的影響
        3.3.1 細胞活性指標
        3.3.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激基因表達量
        3.3.3 炎癥因子基因表達量
        3.3.4 細胞凋亡基因表達量
    3.4 SCD1在鵝肝細胞棕櫚酸耐受性中的作用途徑
        3.4.1 干擾SCD1對TG合成相關(guān)基因的影響
        3.4.2 鵝肝細胞耐受途徑篩選
4 討論
    4.1 鵝肝細胞的棕櫚酸耐受能力評價
    4.2 棕櫚酸對鵝和人肝細胞脂肪酸去飽和的作用
    4.3 SCD1對鵝肝細胞棕櫚酸耐受性的影響
    4.4 SCD1調(diào)控鵝肝細胞棕櫚酸耐受性的機制
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]填飼對朗德鵝SCD5、SREBP2和ELOVL6甲基化和mRNA表達的影響[J]. 方倩倩,李祥龍,唐軍旺,田勇,沈建良,任晉東,邵榮益,盧立志.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報. 2016(10)
[2]鵝SCD1基因真核表達載體構(gòu)建及在肝細胞中的表達[J]. 張宜輝,張蕊,張軍,王洪榮,龔道清.  上海交通大學學報(農(nóng)業(yè)科學版). 2014(02)
[3]鵝肥肝形成相關(guān)基因的研究進展[J]. 邵丹,王來娣,張蕊,龔道清.  中國畜牧獸醫(yī). 2012(09)
[4]鵝LXRα基因的克隆及填飼對其mRNA水平的影響[J]. 韓春春,黃曉宇,王繼文.  畜牧獸醫(yī)學報. 2009(09)
[5]填飼對朗德鵝產(chǎn)肝性能、肝臟組織學和脂生成基因表達水平的影響[J]. 蘇勝彥,李齊發(fā),陳睿,曾怡,祝紅生,張翔,王艷平,謝莊,吳松青,劉玉弟.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2009(07)
[6]朗德鵝肝臟和脂肪組織LXRα基因表達水平的比較[J]. 蘇勝彥,李齊發(fā),劉振山,王艷平,祝洪生,羅紅榮,吳松青,謝莊.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報. 2008(03)
[7]鵝肥肝形成的分子機理研究進展[J]. 瞿浩,王繼文.  四川畜牧獸醫(yī). 2003(05)

博士論文
[1]Cideb和ADRP調(diào)控肝臟VLDL脂化成熟及脂穩(wěn)態(tài)的作用研究[D]. 李烜赫.清華大學 2012

碩士論文
[1]鵝CYP7A1基因克隆、表達調(diào)節(jié)及表達規(guī)律的研究[D]. 楊堃.華中農(nóng)業(yè)大學 2010
[2]鵝ChREBP基因克隆及其在肝脂肪變性中的作用初步研究[D]. 唐慧.四川農(nóng)業(yè)大學 2010



本文編號：3693610