發(fā)布時(shí)間：2022-10-19 15:19

　　飽和脂肪酸含量的增加能引起哺乳動(dòng)物肝細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、炎癥、凋亡等反應(yīng),是導(dǎo)致脂肪肝病變的原因之一。硬脂酰輔酶A去飽和酶（SCD1）作為飽和脂肪酸去飽和的關(guān)鍵酶,在緩解脂肪肝病變中具有關(guān)鍵作用。SCD1在鵝中的表達(dá)豐度和基因組拷貝數(shù)顯著高于哺乳動(dòng)物,推測(cè)SCD1在保護(hù)鵝肥肝脂肪代謝過(guò)程中發(fā)揮重要作用,然而,目前對(duì)SCD1在鵝肝飽和脂肪酸耐受性中的作用研究還未見(jiàn)報(bào)道。本研究利用不同濃度的棕櫚酸處理鵝肝細(xì)胞,并以人正常肝細(xì)胞系LO2細(xì)胞作為參照,通過(guò)MTT檢測(cè)鵝肝細(xì)胞對(duì)棕櫚酸的最大耐受濃度,利用熒光定量PCR（qPCR）對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、炎癥、細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)量變化情況進(jìn)行檢測(cè),對(duì)鵝肝細(xì)胞的棕櫚酸耐受能力進(jìn)行評(píng)價(jià);同時(shí)干擾SCD1探究其在鵝肝細(xì)胞對(duì)棕櫚酸耐受中的作用及其作用途徑。主要研究結(jié)果如下:（1）鵝肝細(xì)胞對(duì)棕櫚酸的最大耐受濃度為0.6mM,而人肝細(xì)胞對(duì)棕櫚酸的最大耐受濃度低于0.2mM。（2）在0.6mM棕櫚酸處理下,鵝肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因（XBP、BIP、ATF6）、炎癥反應(yīng)相關(guān)基因（IL-6、IL-1β、IFN-γ）、細(xì)胞凋亡相關(guān)基因（Bax、Bcl-2、Caspase-3... 

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
常用英文縮寫詞匯
前言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 鵝肝臟脂肪變性特點(diǎn)
    1.2 肝臟脂肪代謝過(guò)程及其調(diào)控機(jī)制
        1.2.1 脂肪合成
        1.2.3 脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)
        1.2.4 脂肪酸氧化
        1.2.5 鵝肝臟脂肪代謝調(diào)控機(jī)制
    1.3 棕櫚酸與細(xì)胞脂毒性相關(guān)反應(yīng)
        1.3.1 棕櫚酸與細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        1.3.2 棕櫚酸與細(xì)胞炎癥反應(yīng)
        1.3.3 棕櫚酸與細(xì)胞凋亡
    1.4 SCD1在脂質(zhì)代謝及脂毒性相關(guān)反應(yīng)中的作用
        1.4.1 SCD1概述
        1.4.2 SCD1在調(diào)控脂肪代謝中的作用
        1.4.3 SCD1在調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的作用
        1.4.4 SCD1在調(diào)控炎癥反應(yīng)中的作用
        1.4.5 SCD1在調(diào)控細(xì)胞凋亡中的作用
    1.5 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 試驗(yàn)樣品
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 主要藥品和試劑
        2.1.4 主要試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 引物設(shè)計(jì)及合成
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 棕櫚酸處理細(xì)胞
        2.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA
        2.2.5 MTT檢測(cè)細(xì)胞活性
        2.2.6 油紅O染色
        2.2.7 總RNA提取及質(zhì)量檢測(cè)
        2.2.8 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        2.2.9 熒光定量PCR
        2.2.10 TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.2.11 細(xì)胞色素c免疫熒光
        2.2.12 DAPI染色
    2.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 鵝肝細(xì)胞對(duì)棕櫚酸的耐受性評(píng)價(jià)
        3.1.1 棕櫚酸對(duì)細(xì)胞活性的影響
        3.1.2 棕櫚酸對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激基因表達(dá)的影響
        3.1.3 棕櫚酸對(duì)炎癥因子表達(dá)的影響
        3.1.4 棕櫚酸對(duì)細(xì)胞凋亡基因表達(dá)的影響
        3.1.5 棕櫚酸對(duì)脂肪酸去飽和過(guò)程中相關(guān)因子的影響
    3.2 鵝SCD1基因siRNA載體的篩選
        3.2.1 siRNA的設(shè)計(jì)與合成
        3.2.2 最佳siRNA序列篩選
    3.3 干擾SCD1對(duì)鵝肝細(xì)胞棕櫚酸耐受性的影響
        3.3.1 細(xì)胞活性指標(biāo)
        3.3.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激基因表達(dá)量
        3.3.3 炎癥因子基因表達(dá)量
        3.3.4 細(xì)胞凋亡基因表達(dá)量
    3.4 SCD1在鵝肝細(xì)胞棕櫚酸耐受性中的作用途徑
        3.4.1 干擾SCD1對(duì)TG合成相關(guān)基因的影響
        3.4.2 鵝肝細(xì)胞耐受途徑篩選
4 討論
    4.1 鵝肝細(xì)胞的棕櫚酸耐受能力評(píng)價(jià)
    4.2 棕櫚酸對(duì)鵝和人肝細(xì)胞脂肪酸去飽和的作用
    4.3 SCD1對(duì)鵝肝細(xì)胞棕櫚酸耐受性的影響
    4.4 SCD1調(diào)控鵝肝細(xì)胞棕櫚酸耐受性的機(jī)制
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3693610