豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）是一種高度接觸傳染性病毒,妊娠母豬以及仔豬被感染后各自表現(xiàn)為繁殖障礙以及嚴(yán)重呼吸道疾病,給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。當(dāng)前,PRRSVI臨床流行毒株既有美洲型高致病性變異毒株、經(jīng)典毒株,又有歐洲型毒株,并且流行毒株基因組仍在持續(xù)變異之中,給臨床診斷造成極大的困難,亟需建立快速、特異的PRRSV鑒別檢測方法。 1.美洲型和歐洲型PRRSV多重TaqMan熒光定量RT-PCR鑒別檢測方法的建立及應(yīng)用 根據(jù)GenBank中發(fā)表的PRRSV美洲型經(jīng)典株VR-2332株、變異株JXAl以及歐洲型LV株的基因組序列差異,利用Primer Express3.0軟件包設(shè)計合成了3條TaqMan探針和2對特異性引物。經(jīng)過反應(yīng)條件的優(yōu)化,建立了能同時檢測PRRSV美洲型變異株、經(jīng)典株以及歐洲型毒株的多重TaqMan熒光定量RT-PCR方法。該方法線性關(guān)系好,以重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)都達(dá)到0.999以上；敏感性高,檢測下限為2.68拷貝/μL,比普通R... 

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要 ABSTRACT 第一章 綜述
1.1 豬繁殖與呼吸綜合征綜述
    1.1.1 病原學(xué)
    1.1.2 基因組結(jié)構(gòu)與功能
    1.1.3 基因多樣性及變異性
    1.1.4 PRRSV的致病性特點(diǎn)
    1.1.5 PRRSV檢測技術(shù)及其研究進(jìn)展
1.2 豬瘟概述
    1.2.1 病原學(xué)
    1.2.2 病毒基因組結(jié)構(gòu)
    1.2.3 CSFV檢測方法
1.3 研究目的及意義
1.4 技術(shù)路線 第二章 同時檢測美洲型、歐洲型PRRSV多重TaqMan熒光定量RT-PCR方法的建立及應(yīng)用
2.1 實驗材料
    2.1.1 病毒
    2.1.2 主要實驗試劑
    2.1.3 主要實驗儀器
2.2 實驗方法
    2.2.1 引物和探針的設(shè)計
    2.2.2 重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建
    2.2.3 TaqMan熒光定量PCR條件最優(yōu)化
    2.2.4 TaqMan熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
    2.2.5 TaqMan熒光定量PCR特異性試驗
    2.2.6 TaqMan熒光定量PCR敏感性試驗
    2.2.7 TaqMan熒光定量PCR重復(fù)性試驗
    2.2.8 多重TaqMan熒光定量PCR的應(yīng)用
2.3 結(jié)果
    2.3.1 重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
    2.3.2 TaqMan熒光定量PCR最佳反應(yīng)條件確定
    2.3.3 TaqMan熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    2.3.4 TaqMan熒光定量PCR特異性分析
    2.3.5 TaqMan熒光定量PCR敏感性分析
    2.3.6 TaqMan熒光定量PCR重復(fù)性分析
    2.3.7 多重TaqMan熒光定量PCR的應(yīng)用
2.4 討論 第三章 同時檢測PRRSV美洲型經(jīng)典株、變異株和TJM-F92疫苗株的多重TaqMan熒光定量RT-PCR方法的建立及應(yīng)用
3.1 實驗材料
    3.1.1 病毒
    3.1.2 主要實驗試劑
    3.1.3 主要實驗儀器
3.2 實驗方法
    3.2.1 引物和探針的設(shè)計
    3.2.2 重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建
    3.2.3 TaqMan熒光定量PCR條件最優(yōu)化
    3.2.4 TaqMan熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
    3.2.5 TaqMan熒光定量PCR特異性試驗
    3.2.6 TaqMan熒光定量PCR敏感性試驗
    3.2.7 TaqMan熒光定量PCR重復(fù)性試驗
    3.2.8 多重TaqMan熒光定量PCR的應(yīng)用
3.3 結(jié)果
    3.3.1 重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
    3.3.2 TaqMan熒光定量PCR最佳反應(yīng)條件確定
    3.3.3 TaqMan熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    3.3.4 TaqMan熒光定量PCR特異性分析
    3.3.5 TaqMan熒光定量PCR敏感性分析
    3.3.6 TaqMan熒光定量PCR重復(fù)性分析
    3.3.7 多重TaqMan熒光定量PCR的應(yīng)用
3.4 討論 第四章 同時檢測美洲型、歐洲型PRRSV以及CSFV多重TaqMan熒光定量RT-PCR方法的建立及應(yīng)用
4.1 實驗材料
    4.1.1 病毒
    4.1.2 主要實驗試劑
    4.1.3 主要實驗儀器
4.2 實驗方法
    4.2.1 引物和探針的設(shè)計
    4.2.2 重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建
    4.2.3 TaqMan熒光定量PCR條件最優(yōu)化
    4.2.4 TaqMan熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
    4.2.5 TaqMan熒光定量PCR特異性試驗
    4.2.6 TaqMan熒光定量PCR敏感性試驗
    4.2.7 TaqMan熒光定量PCR重復(fù)性試驗
    4.2.8 多重TaqMan熒光定量PCR的應(yīng)用
4.3 結(jié)果
    4.3.1 重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
    4.3.2 TaqMan熒光定量PCR最佳反應(yīng)條件確定
    4.3.3 TaqMan熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    4.3.4 TaqMan熒光定量PCR特異性分析
    4.3.5 TaqMan熒光定量PCR敏感性分析
    4.3.6 TaqMan熒光定量PCR重復(fù)性分析
    4.3.7 多重TaqMan熒光定量PCR的應(yīng)用
4.4 討論 第五章 結(jié)論 參考文獻(xiàn) 致謝 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文及專利情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3693225