馬麝病毒性出血癥（Moschus chrysogaster viral hemorrhagic disease,McVHD）為馬麝的一種急性、高度致死性傳染病,其病原馬麝出血癥病毒（Moschus chrysogaster hemorrhagic disease virus,McHDV）與兔出血癥病毒高度同源。為了篩選McHDV保護性抗原,為McVHD疫苗研究奠定基礎,文中通過對McHDV主要結構蛋白VP60抗原表位的分析,設計引物,應用RT-PCR技術擴增獲得三段VP60主要抗原表位區(qū)核酸序列,并采用重疊延伸PCR將3段產(chǎn)物連接后克隆至原核表達載體pET-28a（+）,成功構建原核表達質(zhì)粒pET-truncated-VP60后轉化大腸桿菌Escherichia coli BL21（DE3）,并經(jīng)IPTG誘導表達。純化表達產(chǎn)物免疫3–4月齡非RHD免疫兔,血凝抑制試驗測定抗血清效價。首次免疫后21 d,通過攻毒保護試驗分析重組蛋白的免疫保護效力。結果表明,McHDV VP60主要抗原表位蛋白在大腸桿菌中成功表達,重組蛋白分子質(zhì)量約為45 kDa,且以包涵體形式存在;重組蛋白純化后配制疫... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 毒株、菌種及實驗動物
    1.2 主要試劑
    1.3 引物設計
    1.4 McHDV VP60主要抗原表位序列的擴增
    1.5 McHDV VP60主要抗原表位的原核表達
        1.5.1 原核表達載體的構建
        1.5.2 McHDV VP60主要抗原表位重組蛋白的表達
    1.6 重組蛋白的純化及抗血清制備
    1.7 多克隆抗體的Western blotting檢測
    1.8 免疫保護試驗
        1.8.1 免疫原的制備
        1.8.2 動物免疫
        1.8.3 攻毒試驗
    1.9 病毒檢測
    1.1 0 細菌檢查
2 結果與分析
    2.1 McHDV VP60主要抗原表位的擴增與重組
    2.2 原核表達質(zhì)粒pET-truncated-VP60鑒定
    2.3 McHDV VP60主要抗原表位串聯(lián)序列的原核表達
    2.4 多克隆抗體的制備及效價測定
    2.5 免疫保護效力
        2.5.1 抗體檢測
        2.5.2 攻毒實驗
    2.6 病毒檢測
    2.7 細菌檢查
3 討論
4 結論


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3690473