馬麝病毒性出血癥（Moschus chrysogaster viral hemorrhagic disease,McVHD）為馬麝的一種急性、高度致死性傳染病,其病原馬麝出血癥病毒（Moschus chrysogaster hemorrhagic disease virus,McHDV）與兔出血癥病毒高度同源。為了篩選McHDV保護(hù)性抗原,為McVHD疫苗研究奠定基礎(chǔ),文中通過(guò)對(duì)McHDV主要結(jié)構(gòu)蛋白VP60抗原表位的分析,設(shè)計(jì)引物,應(yīng)用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得三段VP60主要抗原表位區(qū)核酸序列,并采用重疊延伸PCR將3段產(chǎn)物連接后克隆至原核表達(dá)載體pET-28a（+）,成功構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET-truncated-VP60后轉(zhuǎn)化大腸桿菌Escherichia coli BL21（DE3）,并經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。純化表達(dá)產(chǎn)物免疫3–4月齡非RHD免疫兔,血凝抑制試驗(yàn)測(cè)定抗血清效價(jià)。首次免疫后21 d,通過(guò)攻毒保護(hù)試驗(yàn)分析重組蛋白的免疫保護(hù)效力。結(jié)果表明,McHDV VP60主要抗原表位蛋白在大腸桿菌中成功表達(dá),重組蛋白分子質(zhì)量約為45 kDa,且以包涵體形式存在;重組蛋白純化后配制疫... 

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 毒株、菌種及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 主要試劑
    1.3 引物設(shè)計(jì)
    1.4 McHDV VP60主要抗原表位序列的擴(kuò)增
    1.5 McHDV VP60主要抗原表位的原核表達(dá)
        1.5.1 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.5.2 McHDV VP60主要抗原表位重組蛋白的表達(dá)
    1.6 重組蛋白的純化及抗血清制備
    1.7 多克隆抗體的Western blotting檢測(cè)
    1.8 免疫保護(hù)試驗(yàn)
        1.8.1 免疫原的制備
        1.8.2 動(dòng)物免疫
        1.8.3 攻毒試驗(yàn)
    1.9 病毒檢測(cè)
    1.1 0 細(xì)菌檢查
2 結(jié)果與分析
    2.1 McHDV VP60主要抗原表位的擴(kuò)增與重組
    2.2 原核表達(dá)質(zhì)粒pET-truncated-VP60鑒定
    2.3 McHDV VP60主要抗原表位串聯(lián)序列的原核表達(dá)
    2.4 多克隆抗體的制備及效價(jià)測(cè)定
    2.5 免疫保護(hù)效力
        2.5.1 抗體檢測(cè)
        2.5.2 攻毒實(shí)驗(yàn)
    2.6 病毒檢測(cè)
    2.7 細(xì)菌檢查
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]兔瘟病毒VP60基因重組真核質(zhì)粒的構(gòu)建及其免疫原性[D]. 魯忠祥.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3690473