哺乳動物的精卵融合過程是個復雜而精巧的事件,需要一些特異性蛋白相互作用來介導。其中精子上的PDIA3（ERp57）是蛋白二硫鍵異構酶（protein disulfide isomerase, PDI）家族的成員,具有催化二硫鍵的功能,CRISP2是富含半胱氨酸的分泌蛋白（cysteine secretory proteins, CRISPs）家族的成員,具有16個保守的半胱氨酸和它們所形成的復雜的二硫鍵,這兩種蛋白質都參與了精卵的融合過程,但是到目前為止這兩種蛋白質在精卵結合與融合過程中的作用機制尚不清楚。我們猜測PDIA3可能會催化CRISP2分子中的二硫鍵從而引起其構象發(fā)生改變而介導精卵融合。為了驗證這一想法,本實驗構建了絨山羊PDIA3和CRISP2成熟肽和分段真核表達載體,用免疫共沉淀和酵母雙雜交技術檢測了PDIA3與CRISP2能否互相結合。 首先根據(jù)本實驗室克隆的絨山羊CRISP2（GU362703.1）和PDIA3的cDNA序列（GU985268.1）,分析了它們的結構特點及其功能域后,將其各分為兩段,即CRISP2A （24～176aa,去掉信號肽后）、CRISP... 

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 研究論文
    第一章 絨山羊CRISP2和PDIA3分段后真核表達載體和酵母雙雜交載體的構建
        前言
        1 材料和方法
            1.1 材料
            1.2 實驗方法
        2 結果
            2.1 真核表達載體pcDNA-CRISP2、pcDNA-CRISP2A、pcDNA-CRISP2B、pcDNA-Pdia3、pcDNA-Pdia3A、pcDNA-Pdia3B的構建
            2.2 酵母載體pGADT7-CRISP2A、pGADT7-CRISP2B、pGBKT7-PDIA3A和pGBKT7-PDIA3B的構建
        3 討論
    第二章 CRISP2與PDIA3的相互結合的鑒定
        前言
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 實驗步驟
        2 結果
            2.1 免疫共沉淀及Western blot結果
            2.2 CRISP2與PDIA3的酵母雙雜交鑒定結果
        3 討論
第二部分 文獻綜述 絨山羊CRISP2和PDIA3的結構及其功能
    1. CRISP2蛋白的結構特點和功能特點
    2. PDIA3蛋白的結構特點和功能特點
        2.1 PDIA3在內質網(wǎng)上的作用
        2.2 細胞表面的PDIA3
        2.3 細胞液中的PDIA3
        2.4 細胞核中的PDIA3
        2.5 線粒體中的PDIA3
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文和參加的項目



本文編號：3690293