偽狂犬�。≒seudorabies,PR）是一種由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起多種家畜和野生動物的急性、熱性傳染病,但只有豬是PRV的唯一貯存宿主。偽狂犬病能給養(yǎng)豬業(yè)造成極大的經(jīng)濟(jì)損失,特別是2011年末以來PRV變異株在我國的爆發(fā)流行,嚴(yán)重影響了養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。與其他皰疹病毒類似,PRV急性感染后能夠在宿主體內(nèi)形成潛伏感染,潛伏感染時期,病毒基因組不復(fù)制,也不表達(dá)病毒蛋白,僅大量轉(zhuǎn)錄病毒潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄物（Latency Associated Transcripts,LATs）。然而,長期以來,關(guān)于LAT轉(zhuǎn)錄特征及調(diào)控機(jī)制的研究較為缺乏,其轉(zhuǎn)錄與調(diào)控機(jī)制及對病毒感染復(fù)制的影響也不清楚。LATs是由大的潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄本（Large Latency Transcripts,LLT）分子剪接加工形成的,為了研究PRV LLT兩個啟動子LAP1和LAP2在其轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面的作用機(jī)制,本研究首先構(gòu)建一系列供體質(zhì)粒,包括缺失LAP1、缺失LAP1并添加絕緣子cHS4或添加強啟動子CMV、同時缺失LAP1/P2等。然后,利用BAC/galK系統(tǒng)將galK基因替換LLT... 

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 偽狂犬病概述
        1.1.1 偽狂犬病
        1.1.2 偽狂犬病病毒的歷史
    1.2 偽狂犬病病毒的分子生物學(xué)
        1.2.1 偽狂犬病病毒結(jié)構(gòu)特征
        1.2.2 皰疹病毒的復(fù)制
        1.2.3 偽狂犬病病毒感染機(jī)制
    1.3 偽狂犬病病毒潛伏感染研究進(jìn)展
    1.4 皰疹病毒miRNA研究進(jìn)展
    1.5 BAC/galK重組系統(tǒng)原理與應(yīng)用
    1.6 本研究的目的和意義
第二章 LLT啟動子缺失突變病毒的構(gòu)建拯救及其體外生物學(xué)特性分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 病毒、細(xì)胞、質(zhì)粒和菌株
        2.1.2 主要工具酶和試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 常用試劑的配制
        2.1.5 常用培養(yǎng)基的配制
        2.1.6 本章節(jié)引物設(shè)計
        2.1.7 缺失LLT啟動子突變病毒相關(guān)供體質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.1.8 正篩選SW102-BAC-galk的構(gòu)建
        2.1.9 負(fù)篩選系統(tǒng)
        2.1.10 突變病毒拯救
        2.1.11 突變病毒體外生物學(xué)特性分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 pB-L1-R1質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        2.2.2 pB-L1-cHS4-R1質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        2.2.3 pB-L1-cHS4-R2質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        2.2.4 pB-L1-CMVp-R1質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        2.2.5 pB-L1-BGH-R3 質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        2.2.6 pB-L1-cHS4-BGH-R3質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        2.2.7 GalK基因的獲得
        2.2.8 正篩選SW102-BAC-galk鑒定結(jié)果
        2.2.9 負(fù)篩選SW102-BAC-△LAP1鑒定結(jié)果
        2.2.10 負(fù)篩選SW102-BAC-cHS4-△LAP1a鑒定結(jié)果
        2.2.11 負(fù)篩選SW102-BAC-cHS4-△LAP1b鑒定結(jié)果
        2.2.12 負(fù)篩選SW102-BAC-CMVp-△LAP1鑒定結(jié)果
        2.2.13 負(fù)篩選SW102-BAC-△LAP1/P2 鑒定結(jié)果
        2.2.14 負(fù)篩選SW102-BAC-cHS4-△LAP1/P2鑒定結(jié)果
        2.2.15 拯救突變病毒
        2.2.16 突變病毒體外生物學(xué)特性分析結(jié)果
    2.3 討論
第三章 啟動子缺失突變病毒體內(nèi)外轉(zhuǎn)錄 LLT相關(guān)分子的特征分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 病毒與細(xì)胞
        3.1.2 工具酶、試劑、儀器設(shè)備以及培養(yǎng)基
        3.1.3 實驗動物
        3.1.4 本章節(jié)引物設(shè)計
        3.1.5 突變病毒感染Vero細(xì)胞LLT表達(dá)特征的研究
        3.1.6 雙缺失啟動子突變病毒感染小鼠致病性及其組織中LLT表達(dá)特征研究
        3.1.7 突變病毒感染Vero細(xì)胞miRNA表達(dá)特征的研究
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 突變病毒感染Vero細(xì)胞LLT表達(dá)特征
        3.2.2 雙缺失啟動子突變病毒感染小鼠致病性實驗
        3.2.3 雙缺失啟動子突變病毒感染小鼠組織的LLT表達(dá)特征
        3.2.4 JS-2012感染Vero細(xì)胞miRNA表達(dá)特征
        3.2.5 突變病毒感染Vero細(xì)胞miRNA表達(dá)特征
    3.3 討論
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]應(yīng)用Cre/loxp系統(tǒng)構(gòu)建含有BAC序列的重組偽狂犬病毒[J]. 王濤,童武,葉超,于之清,梁超,李國新,高飛,單同領(lǐng),于海,鄭浩,童光志.  中國動物傳染病學(xué)報. 2017(02)
[2]免疫后發(fā)病仔豬中偽狂犬病毒的分離和鑒定[J]. 童武,張青占,鄭浩,劉飛,姜一峰,單同領(lǐng),周艷君,童光志.  中國動物傳染病學(xué)報. 2013(03)
[3]用基于galK的同源重組的方法構(gòu)建arc基因表達(dá)增強的載體[J]. 鄧蓉康,杜曉霞,陳米娜,季一飛,崔義元.  華西醫(yī)學(xué). 2008(03)



本文編號：3688524