松弛素作為胰島素超家族中的一種多肽激素,在生殖機能和很多非生殖生理過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用,而血中松弛素被看成是犬（Canis lupus）和部分其他動物妊娠的標(biāo)志。為了簡便高效獲取犬松弛素,以及開發(fā)具有臨床應(yīng)用價值的犬松弛素生物制劑,本研究進行犬松弛素原基因的原核表達(dá)及制備其多克隆抗體的研究,即以包含犬前松弛素原基因cDNA的質(zhì)粒pMD19-T-Cpreprorelaxin1為材料,PCR擴增犬松弛素原基因cDNA,與表達(dá)載體pET28a連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌（Escherichia coli）BL21（DE3）,異丙基-β-d-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG）誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá),對表達(dá)產(chǎn)物以及純化后重組蛋白用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）和Western blot實驗進行鑒定;以純化犬松弛素原重組蛋白為免疫原,免疫家兔（Oryctolagus cuniculus）制備多克隆抗體,酶聯(lián)免疫吸附實驗（en... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
        1.1.1 質(zhì)粒、菌株和實驗動物
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 引物設(shè)計與引物合成
    1.2 實驗方法
        1.2.1 犬pro RLX原核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
        1.2.2 犬松弛素原重組蛋白的誘導(dǎo)、純化與鑒定
        1.2.3 家兔免疫接種抗體分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 犬松弛素原原核表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.2 犬松弛素原重組蛋白的表達(dá)與純化
    2.3 犬松弛素原多克隆抗體制備與分析
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]犬前松弛素原基因的克隆與生物信息學(xué)分析[J]. 任志華,夏娟,劉歡歡,余樹民,沈留紅,曹隨忠,左之才,鄧俊良,馬曉平.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2016(06)
[2]人黃體松弛素原基因的克隆及在大腸桿菌中的初步表達(dá)[J]. 丁傳天,楊新科,畢勝利,范靈芝,聞良珍,侯云德.  中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志. 1997(04)



本文編號：3684979