星狀病毒（Astrovirus,AstV）是單股正義的RNA病毒,主要感染哺乳類(lèi)和禽類(lèi)動(dòng)物,同時(shí)也是一種人畜共患病病毒。豬星狀病毒在豬群中感染率較高,在世界各地均有分布。星狀病毒變異較快,且諸多證據(jù)表明毒株之間可以發(fā)生重組。系統(tǒng)發(fā)育分析和蛋白解析發(fā)現(xiàn),星狀病毒是一種快速進(jìn)化的病毒,它通過(guò)復(fù)制選擇重組交換其衣殼的部分結(jié)構(gòu)域,產(chǎn)生細(xì)胞嗜性的擴(kuò)展。顯然該病毒具有跨種間傳播及適應(yīng)新宿主的能力,與此同時(shí)星狀病毒也有許多新型的臨床癥狀,如腦炎、痛風(fēng)等相關(guān)。本研究利用生物信息學(xué)的方法,對(duì)星狀病毒中兩個(gè)未知蛋白的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行預(yù)測(cè),并基于豬星狀病毒反向遺傳操作系統(tǒng),探究?jī)蓚�(gè)蛋白對(duì)病毒生物學(xué)特性的影響。1.豬星狀病毒ORFX和ORFY蛋白的結(jié)構(gòu)與功能預(yù)測(cè)及多克隆抗體的制備本研究通過(guò)生物信息學(xué)的方法對(duì)星狀病毒的基因組進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)兩個(gè)潛在的開(kāi)放閱讀框ORFX和ORFY,并對(duì)ORFX和ORFY編碼的蛋白進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能的預(yù)測(cè)。ORFX與ORF2的5’端重疊,與ORF2的起始密碼子間隔7個(gè)氨基酸;ORFY位于ORF2編碼的保守區(qū)P1結(jié)構(gòu)域,與ORF2的起始密碼子間隔約299個(gè)氨基酸。利用蛋白質(zhì)庫(kù)和相關(guān)服務(wù)器對(duì)蛋... 

【文章頁(yè)數(shù)】：89 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫(xiě)對(duì)照表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 星狀病毒的發(fā)現(xiàn)
    1.2 星狀病毒的分類(lèi)
    1.3 星狀病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)
    1.4 星狀病毒的基因組結(jié)構(gòu)
    1.5 星狀病毒的蛋白特征
    1.6 星狀病毒的流行病學(xué)
        1.6.1 人星狀病毒
        1.6.2 豬星狀病毒
        1.6.3 犬星狀病毒
        1.6.4 鴨星狀病毒
    1.7 星狀病毒的發(fā)病機(jī)制
    1.8 星狀病毒的臨床癥狀
    1.9 星狀病毒的檢測(cè)方法
        1.9.1 電子顯微鏡
        1.9.2 病毒的分離與鑒定
        1.9.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
        1.9.4 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)
        1.9.5 定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-qPCR)
        1.9.6 高通量測(cè)序(High-throughputsequencing,HTS)
    1.10 研究的目的與意義
第二章 豬星狀病毒ORFX和ORFY蛋白結(jié)構(gòu)與功能的預(yù)測(cè)及多克隆抗體的制備
    2.1 結(jié)果與分析
        2.1.1 ORFX和ORFY蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)分析
        2.1.2 ORFX和ORFY蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)分析
        2.1.3 ORFX和ORFY蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
    2.2 討論與小結(jié)
第三章 ORFX和ORFY蛋白的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備
    3.1 材料與方法
        3.1.1 質(zhì)粒和菌株
        3.1.2 材料和試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.4 主要儀器設(shè)備
        3.1.5 主要試劑配方
    3.2 方法
        3.2.1 引物設(shè)計(jì)
        3.2.2 基因擴(kuò)增
        3.2.3 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)
        3.2.4 反應(yīng)液回收
        3.2.5 原核表達(dá)載體的酶切與鑒定
        3.2.6 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        3.2.7 陽(yáng)性克隆小量表達(dá)與鑒定
        3.2.8 重組蛋白的大量表達(dá)
        3.2.9 包涵體蛋白的洗滌與純化
        3.2.10 純化蛋白的濃度測(cè)定
        3.2.11 多克隆抗體的制備
        3.2.12 IFA鑒定多克隆抗體的反應(yīng)性
        3.2.13 Western blotting檢測(cè)多克隆抗體與蛋白的特異性
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 基因擴(kuò)增結(jié)果
        3.3.2 重組質(zhì)粒的鑒定
        3.3.3 小量表達(dá)鑒定
        3.3.4 IFA鑒定多克隆抗體反應(yīng)性的結(jié)果
        3.3.5 WB鑒定多克隆抗體與重組蛋白的特異性
    3.4 討論與分析
第四章 pT7-ORFX和pT7-ORFY突變株的構(gòu)建和拯救
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 病毒與細(xì)胞
        4.1.2 材料與試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 引物設(shè)計(jì)
        4.2.2 基因片段克隆
        4.2.3 突變株拯救
        4.2.4 拯救毒株的鑒定
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 基因定點(diǎn)突變克隆和測(cè)序結(jié)果
        4.4.2 細(xì)胞病變觀察
        4.4.3 突變毒株的突變位點(diǎn)檢測(cè)
        4.4.4 拯救病毒的生長(zhǎng)特性
        4.4.5 間接免疫熒光鑒定結(jié)果
    4.5 討論與分析
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
附件


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]廣西豬星狀病毒分子流行病學(xué)調(diào)查[J]. 蘭家暖,劉磊,郭旋,張民秀,盧冰霞,黃福標(biāo),覃熊慧,張寧,黃偉堅(jiān).  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(08)
[2]163例住院腹瀉患兒糞便標(biāo)本星狀病毒檢測(cè)[J]. 劉亞誼,喬海平,徐云鶴.  中國(guó)兒童保健雜志. 1999(03)

博士論文
[1]鴨星狀病毒的遺傳變異性和抗原性及感染鴨肝臟的轉(zhuǎn)錄組分析[D]. 劉寧.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017

碩士論文
[1]2型豬圓環(huán)病毒衣殼蛋白的表達(dá)生產(chǎn)[D]. 陳小紅.華東理工大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3675685