絨山羊體細(xì)胞核移植技術(shù)的研究目前處于剛剛起步階段。本實(shí)驗(yàn)初步建立了轉(zhuǎn)基因絨山羊克隆技術(shù)體系,并探討了不同類(lèi)型細(xì)胞對(duì)絨山羊克隆效率的影響,同時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)基因絨山羊進(jìn)行了初步的鑒定以及生產(chǎn)性能檢測(cè)。1.絨山羊體細(xì)胞核移植技術(shù)的建立：成功體外培養(yǎng)并且保存了四個(gè)胎兒來(lái)源的絨山羊胎兒成纖維細(xì)胞（caprine fetal fibroblast cells,CFC）以及兩個(gè)成體耳尖成纖維細(xì)胞（caprine ear fibroblast cells, CEFC）,并通過(guò)SRY-PCR方法鑒定了CFCs的性別。使用本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建成功的真核表達(dá)載體通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染CFC,經(jīng)G418篩選獲得了多個(gè)CFCs轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系（transgenic caprine fetal fibroblast cells, TCFC）。 TCFC高效表達(dá)外源標(biāo)記基因紅色熒光蛋白,且生長(zhǎng)里旺盛,經(jīng)PCR鑒定外源目的基因已經(jīng)穩(wěn)定整合入TCFC基因組中。在檢測(cè)轉(zhuǎn)基因克隆胚胎發(fā)育能力時(shí),絨山羊卵母細(xì)胞成熟率為72.6%（420/578）,通過(guò)體細(xì)胞核移植獲得重構(gòu)胚胎419枚,卵裂率為86.1%（361/419）,囊胚率為14.8%（62/41... 

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
縮略詞表
引言
    參考文獻(xiàn)
第一章 轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞核移植絨山羊體系的初步建立
    前言
    1 材料
        1.1 主要儀器設(shè)備和試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)材料
        1.3 試劑及耗材
        1.4 實(shí)驗(yàn)所需溶液的配制
    2 方法
        2.1 阿爾巴斯絨山羊胎兒成纖維細(xì)胞(caprine fetal fibroblast cells,CFCs)以及耳尖成纖維細(xì)胞(caprine ear fibroblast cells,CEFCs)的分離培養(yǎng)
        2.2 阿爾巴斯絨山羊胎兒成纖維細(xì)胞的性別鑒定
        2.3 轉(zhuǎn)基因阿爾巴斯絨山羊細(xì)胞的獲得及鑒定
        2.4 絨山羊體細(xì)胞核移植體系的構(gòu)建
        2.5 胚胎移植與產(chǎn)羔
    3 結(jié)果
        3.1 阿爾巴斯絨山羊胎兒成纖維細(xì)胞以及耳尖成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        3.2 阿爾巴斯絨山羊胎兒成纖維細(xì)胞的性別鑒定
        3.3 轉(zhuǎn)基因阿爾巴斯絨山羊細(xì)胞的獲得及鑒定
        3.4 絨山羊體細(xì)胞核移植技術(shù)體系的建立
        3.5 轉(zhuǎn)基因克隆黑羊的產(chǎn)黑與管理
    4 討論
    參考文獻(xiàn)
第二章 供體細(xì)胞類(lèi)型和受體羊條件對(duì)絨山羊體細(xì)胞核移植效率的影響
    引言
    1 材料與方法
        1.1 試劑及耗材
        1.2 絨山羊胎兒成纖維細(xì)胞(Caprine Fetal Fibroblast Cells,CFCs)與成體耳尖成纖維細(xì)胞(Caprine Ear Fibroblast Cells,CEFCs)的分離及性別鑒定
        1.3 絨山羊成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)染和篩選以及鑒定及供體細(xì)胞的準(zhǔn)備
        1.4 絨山羊卵母細(xì)胞的采集,體外成熟與核移植操作
        1.5 胚胎移植與克隆羊的生產(chǎn)
        1.6 克隆效率計(jì)算
        1.7 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果
        2.1 不同細(xì)胞來(lái)源對(duì)克隆效率的影響
        2.2 不同種類(lèi)成纖維細(xì)胞對(duì)克隆效率的影響
        2.3 非轉(zhuǎn)基因供體細(xì)胞與轉(zhuǎn)基因供體細(xì)胞對(duì)克隆效率的影響
        2.4 性別對(duì)克隆效率的影響
        2.5 不同年份受體羊排卵點(diǎn)數(shù)對(duì)克隆效率的影響
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第三章 轉(zhuǎn)基因克隆絨山羊的鑒定與生產(chǎn)性能檢測(cè)
    前言
    1 儀器設(shè)備與試劑材料
    2 方法
        2.1 克隆羔羊基本數(shù)據(jù)的采集
        2.2 克隆羔羊耳尖成纖維細(xì)胞的采集
        2.3 轉(zhuǎn)基因羔羊初步鑒定
        2.4 轉(zhuǎn)基因羊生產(chǎn)性能檢測(cè)與篩選
    3 結(jié)果
        3.1 轉(zhuǎn)基因克隆羔羊與體細(xì)胞克隆羔羊妊娠天數(shù)如初生重的對(duì)比
        3.2 克隆羔羊耳尖成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.3 轉(zhuǎn)基因羔羊初步鑒定
        3.4 轉(zhuǎn)基因羊生產(chǎn)性能檢測(cè)
    4 討論
    參考文獻(xiàn)
結(jié)論
綜述部分
    第一章 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究方法
        1 顯微注射核酸法獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物
        2. 干細(xì)胞介導(dǎo)獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物
        3 體細(xì)胞核移植法
    第二章 影響體細(xì)胞核移植的因素
        1 供體細(xì)胞對(duì)體細(xì)胞核移植效率的影響
        2 卵母細(xì)胞質(zhì)量與克隆胚胎對(duì)克隆效率的影響
        3 胚胎移植方法與動(dòng)物后期管理對(duì)克隆效率的影響
    參考文獻(xiàn)
致謝
博士期間發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]體細(xì)胞克隆牛生產(chǎn)及新生犢牛護(hù)理[D]. 董樹(shù)華.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



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