絨山羊體細胞核移植技術的研究目前處于剛剛起步階段。本實驗初步建立了轉基因絨山羊克隆技術體系,并探討了不同類型細胞對絨山羊克隆效率的影響,同時對轉基因絨山羊進行了初步的鑒定以及生產性能檢測。1.絨山羊體細胞核移植技術的建立：成功體外培養(yǎng)并且保存了四個胎兒來源的絨山羊胎兒成纖維細胞（caprine fetal fibroblast cells,CFC）以及兩個成體耳尖成纖維細胞（caprine ear fibroblast cells, CEFC）,并通過SRY-PCR方法鑒定了CFCs的性別。使用本實驗室構建成功的真核表達載體通過脂質體轉染CFC,經(jīng)G418篩選獲得了多個CFCs轉基因細胞系（transgenic caprine fetal fibroblast cells, TCFC）。 TCFC高效表達外源標記基因紅色熒光蛋白,且生長里旺盛,經(jīng)PCR鑒定外源目的基因已經(jīng)穩(wěn)定整合入TCFC基因組中。在檢測轉基因克隆胚胎發(fā)育能力時,絨山羊卵母細胞成熟率為72.6%（420/578）,通過體細胞核移植獲得重構胚胎419枚,卵裂率為86.1%（361/419）,囊胚率為14.8%（62/41... 

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
縮略詞表
引言
    參考文獻
第一章 轉基因體細胞核移植絨山羊體系的初步建立
    前言
    1 材料
        1.1 主要儀器設備和試劑
        1.2 實驗材料
        1.3 試劑及耗材
        1.4 實驗所需溶液的配制
    2 方法
        2.1 阿爾巴斯絨山羊胎兒成纖維細胞(caprine fetal fibroblast cells,CFCs)以及耳尖成纖維細胞(caprine ear fibroblast cells,CEFCs)的分離培養(yǎng)
        2.2 阿爾巴斯絨山羊胎兒成纖維細胞的性別鑒定
        2.3 轉基因阿爾巴斯絨山羊細胞的獲得及鑒定
        2.4 絨山羊體細胞核移植體系的構建
        2.5 胚胎移植與產羔
    3 結果
        3.1 阿爾巴斯絨山羊胎兒成纖維細胞以及耳尖成纖維細胞的分離培養(yǎng)
        3.2 阿爾巴斯絨山羊胎兒成纖維細胞的性別鑒定
        3.3 轉基因阿爾巴斯絨山羊細胞的獲得及鑒定
        3.4 絨山羊體細胞核移植技術體系的建立
        3.5 轉基因克隆黑羊的產黑與管理
    4 討論
    參考文獻
第二章 供體細胞類型和受體羊條件對絨山羊體細胞核移植效率的影響
    引言
    1 材料與方法
        1.1 試劑及耗材
        1.2 絨山羊胎兒成纖維細胞(Caprine Fetal Fibroblast Cells,CFCs)與成體耳尖成纖維細胞(Caprine Ear Fibroblast Cells,CEFCs)的分離及性別鑒定
        1.3 絨山羊成纖維細胞的轉染和篩選以及鑒定及供體細胞的準備
        1.4 絨山羊卵母細胞的采集,體外成熟與核移植操作
        1.5 胚胎移植與克隆羊的生產
        1.6 克隆效率計算
        1.7 數(shù)據(jù)分析
    2 結果
        2.1 不同細胞來源對克隆效率的影響
        2.2 不同種類成纖維細胞對克隆效率的影響
        2.3 非轉基因供體細胞與轉基因供體細胞對克隆效率的影響
        2.4 性別對克隆效率的影響
        2.5 不同年份受體羊排卵點數(shù)對克隆效率的影響
    3 討論
    參考文獻
第三章 轉基因克隆絨山羊的鑒定與生產性能檢測
    前言
    1 儀器設備與試劑材料
    2 方法
        2.1 克隆羔羊基本數(shù)據(jù)的采集
        2.2 克隆羔羊耳尖成纖維細胞的采集
        2.3 轉基因羔羊初步鑒定
        2.4 轉基因羊生產性能檢測與篩選
    3 結果
        3.1 轉基因克隆羔羊與體細胞克隆羔羊妊娠天數(shù)如初生重的對比
        3.2 克隆羔羊耳尖成纖維細胞的培養(yǎng)
        3.3 轉基因羔羊初步鑒定
        3.4 轉基因羊生產性能檢測
    4 討論
    參考文獻
結論
綜述部分
    第一章 轉基因動物研究方法
        1 顯微注射核酸法獲得轉基因動物
        2. 干細胞介導獲得轉基因動物
        3 體細胞核移植法
    第二章 影響體細胞核移植的因素
        1 供體細胞對體細胞核移植效率的影響
        2 卵母細胞質量與克隆胚胎對克隆效率的影響
        3 胚胎移植方法與動物后期管理對克隆效率的影響
    參考文獻
致謝
博士期間發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3675629