卵巢顆粒細(xì)胞功能的發(fā)揮和子宮內(nèi)膜細(xì)胞的功能調(diào)節(jié)是卵泡發(fā)育和胚胎附植的關(guān)鍵。近年的研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激廣泛參與卵泡發(fā)育和閉鎖,胚胎附植、生長發(fā)育和子宮內(nèi)膜的蛻膜化等雌性生殖過程。X框結(jié)合蛋白1（XBP1）是一種堿性亮氨酸拉鏈（bZIP）蛋白,為CREB/ATF轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中被IRE1剪切激活之后,通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解途徑,恢復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)。它不僅在未折疊的蛋白質(zhì)反應(yīng)中起關(guān)鍵作用,而且作為轉(zhuǎn)錄激活因子廣泛參與細(xì)胞分化、增殖、凋亡,細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)和其他信號通路。本研究利用免疫組化,RNA干擾技術(shù),流式細(xì)胞儀,western blot,實(shí)時熒光定量PCR,細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（CCK8）和ELISA等方法檢測了:（1）類固醇激素對XBP1在小鼠子宮中表達(dá)的調(diào)控作用;（2）XBP1對類固醇激素合成分泌及顆粒細(xì)胞相關(guān)功能影響。（3）植物雌激素赤霉烯酮對子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞XBP1和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激調(diào)控的影響。主要結(jié)果如下:1.在小鼠發(fā)情周期中,XBP1主要表達(dá)分布于子宮內(nèi)膜腔上皮和腺上皮細(xì)胞中,而且在發(fā)情期和間情期的表達(dá)量最高。通過類固醇激素處理模型發(fā)現(xiàn),外源性雌激素可刺激XBP1在小鼠子宮腔上皮及... 

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
文獻(xiàn)綜述
    第一章 類固醇激素和雌性哺乳動物生殖
        1.1 類固醇激素的生成
        1.2 類固醇激素
            1.2.1 雌激素
            1.2.2 雌激素受體
            1.2.3 孕酮
            1.2.4 孕酮受體
        1.3 類固醇激素在發(fā)情周期及早期妊娠中的調(diào)節(jié)變化
    第二章 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和雌性哺乳動物生殖
        2.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和未折疊蛋白反應(yīng)
        2.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和細(xì)胞凋亡
        2.3 卵泡發(fā)育和閉鎖
            2.3.1 卵泡發(fā)育
            2.3.2 卵泡閉鎖與顆粒細(xì)胞凋亡
            2.3.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與卵泡閉鎖,顆粒細(xì)胞凋亡
        2.4 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與雌性動物生殖
        2.5 XBP1的結(jié)構(gòu)和功能
            2.5.1 XBP1的發(fā)現(xiàn)及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
            2.5.2 XBP1的生物學(xué)功能
實(shí)驗(yàn)研究
    第三章 雌激素與孕酮對XBP1表達(dá)的調(diào)節(jié)
        3.1 材料和儀器設(shè)備
            3.1.1 材料和試劑
            3.1.2 儀器設(shè)備
            3.1.3 試驗(yàn)動物
        3.2 試驗(yàn)方法
            3.2.1 小鼠發(fā)情周期的鑒定
            3.2.2 小鼠的激素處理
            3.2.3 小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)
            3.2.4 Western blot分析
            3.2.5 石蠟切片的制備和免疫組化
            3.2.6 熒光定量PCR檢測
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 小鼠發(fā)情周期的鑒定
            3.3.2 XBP1在小鼠發(fā)情周期子宮中的定位表達(dá)
            3.3.3 western blot檢測發(fā)情周期過程中XBP1在小鼠子宮內(nèi)表達(dá)
            3.3.4 免疫組化分析類固醇激素調(diào)節(jié)XBP1在小鼠子宮中的表達(dá)
            3.3.5 Western blot分析類固醇激素對小鼠子宮中XBP1的表達(dá)調(diào)控
            3.3.6 免疫組化分析E_2調(diào)節(jié)XBP1在小鼠子宮中的表達(dá)
            3.3.7 Western blot分析E_2調(diào)節(jié)XBP1在小鼠子宮中的表達(dá)
            3.3.8 免疫組化分析E_2拮抗劑對XBP1在小鼠子宮中表達(dá)的調(diào)節(jié)
            3.3.9 Western blot分析E_2拮抗劑對XBP1在小鼠子宮中表達(dá)的調(diào)節(jié)
            3.3.10 小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中P_4對XBP1表達(dá)的調(diào)節(jié)
            3.3.11 P_4拮抗劑對XBP1在小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的調(diào)節(jié)
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 小鼠XBP1基因shRNA慢病毒干擾載體的構(gòu)建
        4.1 材料和儀器設(shè)備
            4.1.1 材料和試劑
            4.1.2 儀器和設(shè)備
        4.2 方法
            4.2.1 pCD513B-U6-XBP1-shRNA慢病毒干擾載體的構(gòu)建
            4.2.3 慢病毒載體的包裝
            4.2.4 XBP1干擾慢病毒滴度測定
            4.2.5 XBP1-shRNA干擾片段的篩選
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 pCD513B-U6-XBP1-shRNA慢病毒干擾載體的構(gòu)建
            4.3.2 XBP1基因慢病毒干擾載體轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞
            4.3.3 病毒滴度測定
            4.3.4 pCD513B-U6-XBP1-shRNA慢病毒感染NIH3T3細(xì)胞
            4.3.5 XBP1shRNA有效靶點(diǎn)的篩選
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
    第五章 XBP1在小鼠卵巢顆粒細(xì)胞中的功能研究
        5.1 材料和儀器設(shè)備
            5.1.1 材料和試劑
            5.1.2 主要儀器
            5.1.3 試驗(yàn)動物
        5.2 實(shí)驗(yàn)方法
            5.2.1 小鼠卵巢顆粒細(xì)胞的體外培養(yǎng)
            5.2.2 XBP1-shRNA慢病毒顆粒的包裝及濃縮
            5.2.3 XBP1-shRNA慢病毒感染小鼠卵巢顆粒細(xì)胞
            5.2.4 小鼠卵巢顆粒細(xì)胞的RT-q PCR檢測
            5.2.5 小鼠卵巢顆粒細(xì)胞的western blot檢測
            5.2.6 小鼠卵巢顆粒細(xì)胞分泌類固醇激素檢測
            5.2.7 小鼠卵巢顆粒細(xì)胞周期檢測
            5.2.8 小鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡檢測
            5.2.9 小鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖檢測
        5.3 結(jié)果
            5.3.1 XBP1-shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染小鼠卵巢顆粒細(xì)胞
            5.3.2 XBP1-shRNA對激素分泌的影響
            5.3.3 XBP1-shRNA對顆粒細(xì)胞周期與增殖的影響
            5.3.4 XBP1-shRNA對顆粒細(xì)胞凋亡的影響
            5.3.5 XBP1-shRNA干擾對顆粒細(xì)胞功能基因的影響
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
    第六章 XBP1及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在赤霉烯酮引起的山羊子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞凋亡和炎癥中的作用
        6.1 材料和儀器設(shè)備
            6.1.1 細(xì)胞
            6.1.2 材料和試劑
            6.1.3 儀器和設(shè)備
        6.2 實(shí)驗(yàn)方法
            6.2.1 山羊EECs的培養(yǎng)
            6.2.2 ZEA對山羊EECs活力的影響
            6.2.3 ZEA對山羊EECs凋亡的影響
            6.2.4 ZEA對EECs中炎癥細(xì)胞因子分泌的影響
            6.2.5 山羊EEC的RT-qPCR檢測
            6.2.6 山羊EECs的western blot檢測
        6.3 結(jié)果
            6.3.1 ZEA對EECs活力的影響
            6.3.2 ZEA誘導(dǎo)EECs凋亡
            6.3.3 ZEA對EECs中炎癥細(xì)胞因子和NF-κB表達(dá)的影響
            6.3.4 ZEA對EECs中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及XBP1表達(dá)的影響
            6.3.5 4-PBA降低ZEA誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白表達(dá)的增加
            6.3.6 4-PBA對EECs中ZEA誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響
            6.3.7 4-PBA對EECs中ZEA誘導(dǎo)的炎癥的影響
        6.4 討論
        6.5 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
進(jìn)一步研究
參考文獻(xiàn)
縮略詞
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Apoptosis and Expression of Protein TRAIL in Granulosa Cells of Rats with Polycystic Ovarian Syndrome[J]. 張娟,朱桂金,王昕榮,徐蓓,胡琳莉.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2007(03)



本文編號：3671976