腸外致病性大腸桿菌（Extraintestinal Pathogenic E.coli,ExPEC）,是一種重要的人畜共患病病原菌,主要通過其特有的毒力因子侵襲定植到人和動(dòng)物腸道外組織引起疾病。近年來,本實(shí)驗(yàn)室從臨床中分離到大量豬源性ExPEC,多表現(xiàn)為多重耐藥的特性,使得抗生素的治療效果大大降低,而且由于ExPEC的致病機(jī)制尚未闡明,也缺乏有效的疫苗加以控制,給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的威脅。另外,豬源ExPEC特定的毒力因子、種群、血清型與人ExPEC相似,具有潛在的人類感染風(fēng)險(xiǎn)。為有效控制豬源ExPEC的感染,篩選有效的免疫保護(hù)性抗原,研發(fā)有效的疫苗,具有重要的意義。OmpX是一種重要的細(xì)菌外膜蛋白,屬于Ail蛋白家族。該蛋白在其他細(xì)菌中參與細(xì)菌對(duì)細(xì)胞的黏附和侵襲,對(duì)抗宿主的免疫防御等,且與細(xì)菌的毒力有密切關(guān)系。因此,被認(rèn)為有可能作為疫苗開發(fā)的候選靶標(biāo)。本試驗(yàn)以豬源ExPEC PCN042為野生株,通過同源重組構(gòu)建ompX基因缺失株及其回復(fù)補(bǔ)償株,研究其生物學(xué)特性,探討ompX在ExPEC多重耐藥性、生物被膜和致病性中的作用。主要研究結(jié)果如下：1.ompX基因缺失株及回補(bǔ)株的構(gòu)建從野生株P(guān)... 

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
1 文章綜述
    1.1 腸外致病性大腸桿菌概述
        1.1.1 大腸桿菌簡介
        1.1.2 大腸桿菌分類
        1.1.3 大腸桿菌分群
        1.1.4 腸外致病性大腸桿菌及其危害
    1.2 ExPEC毒力因子及致病機(jī)制
    1.3 細(xì)菌外膜蛋白OmpX及其功能研究
        1.3.1 外膜蛋白及其功能
        1.3.2 外膜蛋白OmpX及其功能研究
2 研究目的和意義
3 材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 質(zhì)粒
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 培養(yǎng)基與抗生素及其配制
        3.1.5 電泳相關(guān)溶液配制
        3.1.6 主要儀器設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 外膜蛋白基因ompX缺失株的構(gòu)建
        3.2.2 ompX基因缺失回補(bǔ)株的構(gòu)建
        3.2.3 ompX基因缺失株和回補(bǔ)株Cm△ompX SDS-PAGE驗(yàn)證
        3.2.4 ompX基因缺失株遺傳穩(wěn)定性測定
        3.2.5 缺失株生長特性測定
        3.2.6 運(yùn)動(dòng)性檢測
        3.2.7 耐藥性評(píng)價(jià)
        3.2.8 生物被膜形成能力的評(píng)價(jià)
        3.2.9 細(xì)胞致病性試驗(yàn)
        3.2.10 小鼠毒力試驗(yàn)LD_(50)的測定
        3.2.11 組織器官載菌量的測定
4 結(jié)果與分析
    4.1 ompX上下同源臂的擴(kuò)增
    4.2 ompX上下游同源臂的重疊
    4.3 pRE112-△ompX重組質(zhì)粒雙酶切鑒定
    4.4 雙親本結(jié)合轉(zhuǎn)移篩選ompX缺失株的PCR鑒定
    4.5 △ompX互補(bǔ)菌株Cm△ompX的構(gòu)建
    4.6 SDS-PAGE對(duì)ompX缺失株和回補(bǔ)株進(jìn)行驗(yàn)證
    4.7
        4.7.1 遺傳穩(wěn)定性分析
        4.7.2 生長特性分析
    4.8 運(yùn)動(dòng)性測定
    4.9 生物被膜形成能力測定
    4.10 耐藥性研究
    4.11 細(xì)胞黏附侵襲能力分析
    4.12 胞內(nèi)存活試驗(yàn)
    4.13 小鼠感染試驗(yàn)
        4.13.1 小鼠感染試驗(yàn)及LD_(50)測定
        4.13.2 組織器官載菌量測定
5 討論
    5.1 基因缺失突變株的構(gòu)建
    5.2 ompX基因在ExPEC群體行為中的作用分析
    5.3 ompX基因缺失可影響ExPEC對(duì)四環(huán)素和頭孢噻肟敏感性
    5.4 ompX基因在ExPEC致病性中發(fā)揮重要作用
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3671681