斷奶仔豬腹瀉（PWD）問題一直是養(yǎng)豬業(yè)的難題,每年都給全球經(jīng)濟(jì)造成巨大損失。目前主要是依靠抗生素防控PWD的發(fā)病率,并有明顯下降。研究表明,益生菌作為補(bǔ)充劑添加到飼料中具有良好效果。但是,乳酸菌制劑存在作用效果較弱、保存困難等問題。因此,本試驗(yàn)旨在制備出優(yōu)質(zhì)的乳酸菌（SeAg-LAB）制劑及乳酸菌源硒、銀的納米顆粒（SeAg-NA）,增強(qiáng)乳酸菌制劑在臨床中使用效果,提高仔豬機(jī)體免疫力,預(yù)防疾病發(fā)生。本研究首先對(duì)PWD流行病學(xué)調(diào)查,然后制備出SeAg-LAB、SeAg-NA,之后進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn),分析SeAg-LAB、SeAg-NA的應(yīng)用對(duì)ETEC K88感染引起的腸道損傷的保護(hù)作用。得出以下結(jié)果:流行病學(xué)研究調(diào)查顯示,從黑龍江省斷奶仔豬腹瀉248份糞便樣品中分離出238株致病性大腸桿菌。檢測(cè)結(jié)果表明,F4、F18、F41陽性率分別為8.4%、11.34%、27.73%,STa、STb、EAST1陽性率分別為44.96%、28.15%、20.59%。與文獻(xiàn)報(bào)道相比,F41菌毛基因的檢出率增高,STa、STb等毒素基因檢出率也在上升,但是不同國(guó)家不同地區(qū)毒力基因的檢出率均存在差異性。生物被膜形... 

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 PWD的概述
        1.1.1 PWD危害
        1.1.2 PWD發(fā)病原因
        1.1.3 致病性大腸桿菌在PWD發(fā)生中的作用
    1.2 益生乳酸菌的功能
    1.3 乳酸菌制劑的保存進(jìn)展
    1.4 乳酸菌制劑的應(yīng)用
    1.5 研究的目的和意義
2 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 樣品來源
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 試驗(yàn)菌株
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.5 引物合成
        2.1.6 試驗(yàn)儀器和設(shè)備
    2.2 流行病學(xué)調(diào)查
        2.2.1 E.coli分離鑒定
        2.2.2 毒力基因的檢測(cè)
        2.2.3 生物被膜形成能力測(cè)定
        2.2.4 藥敏試驗(yàn)
        2.2.5 遺傳分群
    2.3 適合用于納米顆粒制備的乳酸菌菌株的篩選
        2.3.1 乳酸菌活化
        2.3.2 乳酸菌最適亞硒酸鈉濃度的選擇
        2.3.3 富硒能力強(qiáng)的乳酸菌菌株的初步篩選
        2.3.4 乳酸菌富硒能力的測(cè)定
        2.3.5 乳酸菌最適硝酸銀濃度的選擇
        2.3.6 富銀能力強(qiáng)的乳酸菌菌株的初步篩選
        2.3.7 乳酸菌富銀能力的測(cè)定
        2.3.8 富含單質(zhì)硒、單質(zhì)銀的乳酸菌菌液的制備
    2.4 乳酸菌常溫保存條件篩選
        2.4.1 常溫保存凍干制劑配方的篩選
        2.4.2 乳酸菌制劑與菌液比例對(duì)乳酸菌凍干存活率的影響
        2.4.3 乳酸菌制劑冷凍干燥
        2.4.4 活菌計(jì)數(shù)及存活率的測(cè)定
    2.5 乳酸菌源Se-Ag納米顆粒制備及其基本表征
        2.5.1 制備納米顆粒
        2.5.2 電鏡觀察
        2.5.3 乳酸菌源SeAg-NA抑菌效果測(cè)定
    2.6 乳酸菌源SeAg-NA及 SeAg-LAB對(duì)小鼠的保護(hù)性試驗(yàn)
        2.6.1 菌株的準(zhǔn)備及處理
        2.6.2 小鼠的保護(hù)性試驗(yàn)
        2.6.3 樣品處理
    2.7 指標(biāo)檢測(cè)
        2.7.1 DAI的評(píng)估
        2.7.2 十二指腸細(xì)菌計(jì)數(shù)
        2.7.3 病理學(xué)檢測(cè)
        2.7.4 DAO指標(biāo)的檢測(cè)
        2.7.5 檢測(cè)抗氧化指標(biāo)SOD、GSH-Px、T-AOC活性及MDA含量變化
        2.7.6 檢測(cè)細(xì)胞因子IL-10、IL-6、IL-1β、MPO含量變化
        2.7.7 實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定ZO-1、ocln、TLR-2、iNOS、cryptdin-1、mucin-2、CRS4C基因表達(dá)變化
    2.8 乳酸菌源SeAg-NA及 SeAg-LAB對(duì)仔豬的動(dòng)物試驗(yàn)
    2.9 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果
    3.1 流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果
        3.1.1 E.coli分離鑒定結(jié)果
        3.1.2 毒力基因檢測(cè)結(jié)果
        3.1.3 生物被膜形成能力檢測(cè)結(jié)果
        3.1.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果
        3.1.5 遺傳分群結(jié)果
        3.1.6 致病性E.coli的特征及發(fā)生的變化
    3.2 適合用于乳酸菌源SeAg-NA制備的乳酸菌菌株的篩選
        3.2.1 乳酸菌最適亞硒酸鈉濃度結(jié)果
        3.2.2 富硒能力強(qiáng)的乳酸菌菌株的初步篩選結(jié)果
        3.2.3 乳酸菌富硒能力的測(cè)定結(jié)果
        3.2.4 乳酸菌最適硝酸銀濃度
        3.2.5 富銀能力強(qiáng)的乳酸菌菌株的初步篩選結(jié)果
        3.2.6 乳酸菌在不同濃度下富銀能力測(cè)定結(jié)果
    3.3 常溫保存凍干保護(hù)劑結(jié)果
        3.3.1 乳酸菌保護(hù)劑配方篩選結(jié)果
        3.3.2 乳酸菌保護(hù)劑與菌液最佳比例的確定結(jié)果
        3.3.3 常溫保存乳酸菌制劑的存活率測(cè)定結(jié)果
    3.4 納米顆粒電鏡結(jié)果
    3.5 乳酸菌源SeAg-NA的抑菌結(jié)果
    3.6 SeAg-NA及 SeAg-LAB對(duì)小鼠的保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果
        3.6.1 DAI評(píng)分
        3.6.2 十二指腸細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果
        3.6.3 十二指腸病理結(jié)果
        3.6.4 DAO檢測(cè)結(jié)果
        3.6.5 抗氧化指標(biāo)SOD、GSH-Px、T-AOC活性及MDA檢測(cè)結(jié)果
        3.6.6 細(xì)胞因子IL-6、IL-10、IL-1β、MPO檢測(cè)結(jié)果
        3.6.7 實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定ZO-1、ocln、TLR-2、iNOS、cryptdin-1、mucin-2、CRS4C結(jié)果
    3.7 乳酸菌源SeAg-NA及 SeAg-LAB對(duì)仔豬的促生長(zhǎng)作用結(jié)果
4 討論
    4.1 課題設(shè)計(jì)思路
    4.2 流行病學(xué)的研究
        4.2.1 毒力基因的特征
        4.2.2 生物被膜形成能力的特征
        4.2.3 耐藥性的特征
        4.2.4 遺傳分群的特征
    4.3 SeAg-LAB及乳酸菌源SeAg-NA的濃度分析
    4.4 乳酸菌制劑的優(yōu)化條件對(duì)存活率的影響因素
    4.5 乳酸菌常溫保存制劑的探索
    4.6 乳酸菌源SeAg-NA抑菌效果分析
    4.7 對(duì)小鼠保護(hù)性效果分析
        4.7.1 病理學(xué)分析
        4.7.2 抗氧化指標(biāo)SOD、GSH-Px、T-AOC活性及MDA含量對(duì)PWD分析
        4.7.3 細(xì)胞因子IL-10、IL-6、IL-1β 、MPO含量對(duì)PWD的分析
        4.7.4 實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定ZO-1、ocln、TLR-2、iNOS、cryptdin-1、mucin-2、CRS4C的結(jié)果對(duì)PWD分析
        4.7.5 乳酸菌源Se-Ag納米顆粒ETEC K88 感染腸道損傷的保護(hù)作用
    4.8 對(duì)仔豬的保護(hù)性效果的分析
    4.9 乳酸菌制劑在臨床上的應(yīng)用
    4.10 下一步設(shè)想
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3670936