發(fā)布時間：2022-08-04 10:07

　　胚胎干細胞（Embryonic Stem Cells, ESCs）的建系受其細胞來源以及培養(yǎng)環(huán)境等多種因素的影響,其中來自囊胚的ESCs受囊胚所處發(fā)育階段的影響最大。囊胚形成到囊胚植入子宮壁期間,其多能性細胞處于一種不斷自我更新和分化的過程,可能同時存在不同狀態(tài)的多能性細胞并最終決定其衍生的ESCs的多能性狀態(tài)。因此,本研究擬探討不同發(fā)育階段胚胎的多能性基因表達模式及其對分離培養(yǎng)水牛類ESCs效果的影響,并分析其所處的多能性狀態(tài),以期確定適合水牛類ESCs分離培養(yǎng)的囊胚發(fā)育階段。首先,對水牛不同發(fā)育階段早期胚胎（桑椹胚、早期囊胚、囊胚、擴張囊胚和孵化囊胚）的多能性相關基因的表達模式進行了分析,發(fā)現(xiàn)多能性基因主要在桑椹胚和早期囊胚表達,原始態(tài)相關基因KLF4、TBX3和REX-1在這兩個階段高水平表達；囊胚是一個相對沉默的基因表達時期,大部分多能性基因表達下調(diào)；擴張囊胚中KLF4、TBX3和REX-1表達量較低且高表達始發(fā)態(tài)相關基因FGF5。對培養(yǎng)至第5天的水牛胚胎進行2i （1 μmol/mL PD0325901,3 μmol/mL CHIR99021）培養(yǎng)處理,發(fā)現(xiàn)2i培養(yǎng)處理對水牛... 

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞
綜述部分
    第一章 原始態(tài)(Naive state)和始發(fā)態(tài)(Primed state)胚胎干細胞的研究進展
        1 胚胎干細胞(Embryonic Stem Cells,ESCs)研究簡史
        2 原始態(tài)(Naive State)和始發(fā)態(tài)(Primed State)胚胎干細胞
            2.1 小鼠胚胎干細胞(mouse ESCs,mESCs)和人胚胎干細胞(human ESCs,hESCs)的異同
                2.1.1 mESCs和hESCs的共同特點
                2.1.2 mESCs和hESCs的差異
            2.2 多能性干細胞的不同狀態(tài)：原始態(tài)(Naive State)和始發(fā)態(tài)(Primed State)
                2.2.1 原始態(tài)多能性干細胞
                2.2.2 始發(fā)態(tài)多能性干細胞
                2.2.3 原始態(tài)和始發(fā)態(tài)多能性干細胞之間的轉(zhuǎn)換
                2.2.4 影響原始態(tài)和始發(fā)態(tài)多能性干細胞衍生的重要因素
        3 2i抑制劑對原始態(tài)ESCs的維持
        4 牛和水牛ESCs研究進展
        5 研究目的與意義
試驗部分
    第二章 水牛不同發(fā)育階段胚胎的多能性基因表達模式研究
        1 材料和方法
            1.1 材料
                1.1.1 試驗樣品及來源
                1.1.2 主要試驗試劑及藥品
                1.1.3 主要儀器和耗材
                1.1.4 主要溶液配制
                1.1.5 生物軟件
            1.2 試驗方法
                1.2.1 水牛卵母細胞的體外受精與胚胎培養(yǎng)
                1.2.2 水牛囊胚的收集與微量反轉(zhuǎn)錄為cDNA
                1.2.3 qRT-PCR檢測基因在mRNA水平的表達情況
                1.2.4 胚胎的免疫組織化學
            1.3 試驗設計
            1.4 統(tǒng)計分析
        2 結(jié)果
            2.1 水牛不同發(fā)育階段胚胎相關多能性基因表達模式分析
            2.2 2i對水牛胚胎發(fā)育的影響
            2.3 2i對水牛不同發(fā)育階段囊胚多能性的影響
        3 討論
        4 結(jié)論
    第三章 水牛囊胚發(fā)育階段對水牛類ESCs分離培養(yǎng)效果的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 試驗樣品與來源
                1.1.2 主要試驗試劑及藥品
                1.1.3 主要溶液配制
            1.2 試驗方法
                1.2.1 飼養(yǎng)層的制備
                1.2.2 水牛類ESCs的分離培養(yǎng)
                1.2.3 水牛類ESCs鑒定
                1.2.4 試驗設計
                1.2.5 統(tǒng)計分析
        2 結(jié)果分析
            2.1 不同發(fā)育階段囊胚及2i對水牛類ESCs初步衍生的影響
            2.2 不同發(fā)育階段囊胚源的類ESCs的多能性基因表達模式
            2.3 水牛類ESCs的生物特性分析
        3 討論
        4 結(jié)論
    第四章 水牛類ESCs多能性狀態(tài)的研究
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 實驗樣品及來源
                1.1.2 主要試驗試劑及藥品
                1.1.3 主要試劑配制
            1.2 試驗方法
                1.2.1 H3K27me3檢測雌性水牛類ESCs XaXa染色體活性
                1.2.2 檢測原始態(tài)基因(REX-1、KLF4、TBX3)和始發(fā)態(tài)基因(FGF5、ACTA2)的表達
                1.2.3 檢測水牛類ESCs對不同多能性信號因子的反應
        2 結(jié)果
            2.1 雌性水牛類ESCs性染色體活性狀態(tài)分析
            2.2 檢測原始態(tài)多能性基因REX-1、KLF4、TBX3和始發(fā)態(tài)多能性基因FGF5的表達
            2.3 檢測水牛類ESCs對不同多能性信號的反應
        3 討論
        4 結(jié)論
全文結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表學術論文



本文編號：3669341