建立一種檢測(cè)牛IFN-α、IFN-β基因SYBY GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,旨在為抗病毒相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。設(shè)計(jì)合成擴(kuò)增牛IFN-α、IFN-β基因的特異性引物,采用RT-PCR從牛脾臟中擴(kuò)增出目的DNA片段,將其克隆至pMD18-T載體獲得牛IFN-α、IFN-β質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品,以質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品為模板,優(yōu)化熒光定量PCR反應(yīng)條件,建立牛IFN-α、IFN-β基因SYBY GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,結(jié)果表明,牛IFN-α、IFN-β標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2分別為0.958 8和0.996 52,線性良好;擴(kuò)增效率為0.97和0.91,效率高;熔解曲線均為單峰,特異性較高,并具有良好的重復(fù)。結(jié)果證實(shí),本研究所建立的方法敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好。 

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 主要試劑與儀器
    1.3 引物設(shè)計(jì)與合成
    1.4 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建
        1.4.1 牛脾臟組織總RNA的提取
        1.4.2 反轉(zhuǎn)錄
        1.4.3 PCR反應(yīng)
        1.4.4 核酸凝膠電泳試驗(yàn)
        1.4.5 基因克隆與序列分析
    1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建
        1.5.1 測(cè)定質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的濃度
        1.5.2 熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    1.6 熒光定量PCR的重復(fù)性試驗(yàn)
    1.7 熒光定量PCR的特異性試驗(yàn)
    1.8 熒光定量PCR的敏感性試驗(yàn)
2 結(jié)果
    2.1 核酸瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果
    2.2 序列分析結(jié)果
    2.3 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
    2.4 熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立結(jié)果
    2.5 熒光定量PCR的重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
    2.6 熒光定量PCR的特異性試驗(yàn)結(jié)果
    2.7 熒光定量PCR的敏感性試驗(yàn)結(jié)果
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]牛Ⅰ型干擾素家族新成員（IFN-ε、IFN-κ、IFN-χ）抗病毒信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與表達(dá)調(diào)控研究[D]. 郭永麗.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017

碩士論文
[1]綿羊白介素1β及其受體拮抗因子熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[D]. 遲丹.吉林大學(xué) 2016



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