沙門菌能夠引起多種動物的胃腸道疾病,其包含多種流行性血清型。O-抗原是沙門菌的保護性抗原,其特異性抗體能夠有效地清除細菌的感染。本研究通過異源表達O-抗原的策略,構(gòu)建了三株表達紐波特沙門菌O-抗原的重組鼠傷寒沙門菌疫苗株,并在小鼠模型上評估了這些重組疫苗株的免疫原性和免疫保護效果。1鼠傷寒沙門菌重組株的構(gòu)建利用Gibson組裝法構(gòu)建表達紐波特沙門菌O-抗原基因簇部分基因（wzx-wbaR-wbaL-wbaQ-wzy-wbaW-wbaZ）的表達質(zhì)粒pCZ11,將其導(dǎo)入三株鼠傷寒沙門菌突變株SLT19（Δasd）、SLT20（ΔasdΔrfbN）、SLT22(ΔasdΔrfbN?pagL::TaraC P_BAD rfbN)中,得到三株鼠傷寒沙門菌重組株SLT19（pCZ11）、SLT20（pCZ11）、SLT22（pCZ11）。銀染和免疫印跡實驗表明,SLT19（pCZ11）能夠同時表達同源鼠傷寒沙門菌和異源紐坡特沙門菌O-抗原;SLT20（pCZ11）只表達異源O-抗原;阿拉伯糖存在時,SLT22（pCZ11）能夠同時表達兩種O-抗原,阿拉伯糖不存在時,只表達異源O... 

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1 沙門菌疫苗的研究進展
        1.1 化學(xué)誘變減毒疫苗
        1.2 抗生素誘導(dǎo)減毒疫苗
        1.3 基因工程減毒疫苗
    2 沙門菌O-抗原概述
        2.1 O-抗原的合成
        2.2 O-抗原的生物學(xué)功能
        2.3 O-抗原的免疫原性及相關(guān)疫苗研究
    3 研究目的和意義
第二章 鼠傷寒沙門菌重組株的構(gòu)建
    1 研究目的
    2 材料
        2.1 菌株和質(zhì)粒
        2.2 主要試劑
        2.3 主要溶液的配制
            2.3.1 培養(yǎng)基和抗生素
            2.3.2 瓊脂糖凝膠電泳相關(guān)試劑
            2.3.3 SDS-PAGE相關(guān)試劑
            2.3.4 Western-blot相關(guān)試劑
        2.4 主要儀器
    3 實驗方法
        3.1 引物設(shè)計
        3.2 感受態(tài)細胞的制備和轉(zhuǎn)化
            3.2.1 感受態(tài)細胞的制備
            3.2.2 轉(zhuǎn)化
        3.3 重組自殺性質(zhì)粒pRE112-ΔrfbN、pRE112-Δasd、pRE112-Δcrp、pRE112-ΔpagL的構(gòu)建
        3.4 重組自殺性質(zhì)粒pRE112-?pagL::TaraCPBADrfbN的構(gòu)建
        3.5 鼠傷寒沙門菌基因缺失株的構(gòu)建
        3.6 多糖表達質(zhì)粒pCZ11的構(gòu)建
        3.7 重組株的LPS表型鑒定
            3.7.1 樣品處理
            3.7.2 SDS-PAGE
            3.7.3 銀染
            3.7.4 Western-blot
    4 結(jié)果與分析
        4.1 鼠傷寒沙門菌突變株的構(gòu)建
        4.2 多糖表達質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.3 重組株的LPS表型圖譜
    5 討論
    6 小結(jié)
第三章 鼠傷寒沙門菌重組株生物學(xué)特性及毒力研究
    1 研究目的
    2 材料
        2.1 菌株
        2.2 主要試劑
        2.3 實驗動物
        2.4 主要試劑的配制
        2.5 主要儀器
    3 實驗方法
        3.1 重組株的運動性測定
        3.2 重組株對多黏菌素B和膽鹽的敏感性測定
        3.3 定殖實驗
        3.4 毒力(LD50)測定
    4 結(jié)果分析
        4.1 鼠傷寒沙門菌重組株的運動性
        4.2 多黏菌素B和膽鹽的敏感性
        4.3 鼠傷寒沙門菌重組株定殖和侵襲能力測定
        4.4 毒力測定
    5 討論
    6 小結(jié)
第四章 鼠傷寒沙門菌二價疫苗株的免疫原性及交叉保護力
    1 研究目的
    2 材料
        2.1 菌株
        2.2 主要試劑
        2.3 實驗動物
        2.4 主要試劑的配制
        2.5 主要儀器
    3 實驗方法
        3.1 毒力(LD50)測定
        3.2 疫苗株的免疫接種
        3.3 樣品采集
        3.4 免疫檢測
        3.5 攻毒挑戰(zhàn)
        3.6 血清殺菌實驗
        3.7 組織病理檢測HE染色
    4 結(jié)果分析
        4.1 鼠傷寒沙門菌二價疫苗株的毒力
        4.2 鼠傷寒沙門菌二價疫苗株的免疫原性
        4.3 血清殺菌效果測定
        4.4 鼠傷寒沙門菌二價疫苗株的免疫保護效果
        4.5 小鼠組織H&E染色結(jié)果
    5 討論
    6 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄
作者簡歷



本文編號：3667749