發(fā)布時(shí)間：2022-07-20 19:43

　　色素沉著需要復(fù)雜的機(jī)制來調(diào)控。多項(xiàng)研究表明microRNAs（miRNAs）可以參與調(diào)控色素沉著,但是機(jī)制尚未闡明。外泌體作為細(xì)胞間的通訊載體,能夠與相鄰或遠(yuǎn)處的細(xì)胞進(jìn)行交流。本研究證實(shí)了外泌體攜帶miRNAs參與角化細(xì)胞和黑色素細(xì)胞串?dāng)_的一種新型調(diào)節(jié)色素沉著的機(jī)制。且運(yùn)用多種分子生物學(xué)技術(shù)研究分析了 miR-330-5p對(duì)色素沉著的抑制作用,外泌體特異性標(biāo)志物TSG101在角化細(xì)胞和黑色素細(xì)胞中的表達(dá)與定位,將黑色素細(xì)胞與過量表達(dá)miR-330-5p的外泌體共培養(yǎng),檢測(cè)共培養(yǎng)后黑色素細(xì)胞產(chǎn)生黑色素含量的變化,以及靶基因TYR及其相關(guān)基因TYRP1、TYRP2和MITF表達(dá)量的變化。結(jié)果如下:（1）利用qRT-PCR技術(shù)和western blotting技術(shù)分析黑色素細(xì)胞過表達(dá)miR-330-5p后,TYR、TYRP1和TYRP2的相對(duì)表達(dá)量。二項(xiàng)結(jié)果均表明miR-330-5p可有效抑制TYR及其相關(guān)基因的表達(dá),同時(shí)檢測(cè)黑色素含量,結(jié)果顯示過表達(dá)組黑色素含量降低。（2）利用免疫熒光、qRT-PCR技術(shù)和western blotting技術(shù)鑒定角化細(xì)胞分泌的外泌體。免疫熒光結(jié)果顯示:TS... 

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
前言
文獻(xiàn)綜述
    1. 黑色素生成研究
        1.1 黑色素生物學(xué)特性
        1.2 紫外線輻射與黑色素生成
        1.3 黑色素生成相關(guān)基因
    2. miRNAs及其與皮膚相關(guān)的研究
    3. 外泌體相關(guān)研究
        3.1 外泌體的生物學(xué)特性
        3.2 外泌體的功能
        3.3 外泌體在皮膚生理和病理過程的應(yīng)用
實(shí)驗(yàn)一 外源性miR-330-5p下調(diào)黑色素細(xì)胞中TYR表達(dá)
    1 實(shí)驗(yàn)材料與主要試劑儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 小鼠黑色素細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2 miR-330-5p轉(zhuǎn)染小鼠黑色素細(xì)胞
        2.3 黑色素含量的測(cè)定
        2.4 細(xì)胞總RNA和總蛋白的提取
        2.5 qRT-PCR檢測(cè)TYR及其下游基因
        2.6 Western Blotting分析TYR及其下游基因
        2.7 數(shù)據(jù)處理
    3 結(jié)果
        3.1 miR-330-5p轉(zhuǎn)染小鼠黑色素細(xì)胞及效率
        3.2 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)黑色素含量
        3.3 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)TYR及其下游基因mRNA表達(dá)水平
        3.4 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)TYR及其下游蛋白表達(dá)水平
    4 小結(jié)
實(shí)驗(yàn)二 角化細(xì)胞源外泌體的分離與鑒定
    1 實(shí)驗(yàn)材料與主要試劑儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 小鼠角化細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2 免疫熒光法分析角化細(xì)胞中外泌體特異性蛋白的表達(dá)
        2.3 角化細(xì)胞轉(zhuǎn)染mR-330-5p
        2.4 獲得富含外泌體的培養(yǎng)基
        2.5 超速離心法分離提取外泌體
        2.6 外泌體總蛋白的提取
        2.7 Western Blotting分析外泌體特異性蛋白
        2.8 外泌體總RNA的提取
        2.9 qRT-PCR檢測(cè)外泌體中miR-330-5p
    3 結(jié)果
        3.1 小鼠角化細(xì)胞形態(tài)
        3.2 TSG101在角化細(xì)胞上的表達(dá)
        3.3 TSG101和CD9在外泌體蛋白中的表達(dá)
        3.4 轉(zhuǎn)染后角化細(xì)胞分泌的外泌體miR-330-5p表達(dá)水平
    4 小結(jié)
實(shí)驗(yàn)三 角化細(xì)胞源性外泌體攜帶miR-330-5p與黑色素細(xì)胞的相互作用
    1 實(shí)驗(yàn)材料與主要試劑儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 外泌體與黑色素細(xì)胞共培養(yǎng)
        2.2 熒光原位雙雜交
        2.3 miR-330-5p轉(zhuǎn)染小鼠角化細(xì)胞
        2.4 黑色素細(xì)胞免疫熒光
        2.5 黑色素含量測(cè)定
        2.6 黑色素細(xì)胞總RNA和總蛋白的提取
        2.8 qRT-PCR檢測(cè)TYR及其上下游基因
        2.9 Western Blotting分析TYR及其上下游基因
    3 結(jié)果
        3.1 黑色素細(xì)胞熒光原位雜交結(jié)果
        3.2 外源性外泌體在黑色素細(xì)胞中的表達(dá)
        3.3 共培養(yǎng)后細(xì)胞內(nèi)黑色素含量
        3.4 共培養(yǎng)后細(xì)胞內(nèi)TYR及其上下游基因mRNA表達(dá)水平
        3.5 共培養(yǎng)后細(xì)胞內(nèi)TYR及其上下游蛋白表達(dá)水平
    4 小結(jié)
討論
參考文獻(xiàn)
Abstract
附錄
    在讀研究生期間發(fā)表論文
    中英文對(duì)照及縮略表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR-411a-3p抑制羊駝黑色素細(xì)胞黑色素的生成[J]. 李佳晟,孫曉江,胡帥鵬,姬凱元,劉博,劉學(xué)賢,楊?yuàn)檴?張俊珍,范瑞文.  中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2017(09)
[2]內(nèi)皮素3在不同毛色綿羊皮膚中的差異表達(dá)[J]. 楊?yuàn)檴?白俊明,范瑞文,耿建軍,焦丁興,周英,董常生.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2015(11)



本文編號(hào)：3664643