馬立克病（MD）是由α-皰疹病毒科的馬立克病毒（MDV）引起雞死亡的高度傳染性腫瘤病,以淋巴組織的增生和腫瘤形成為特征,外周神經(jīng)、性腺、虹膜、各種臟器、肌肉和皮膚發(fā)生單核細(xì)胞浸潤為主。針對國內(nèi)爆發(fā)現(xiàn)狀,馬立克病已被認(rèn)為是禽傳染病中最嚴(yán)重的疾病之一。疫苗防控是本病的關(guān)鍵,近年來常有免疫雞群發(fā)生馬立克的報道。四川某經(jīng)CVI988/Rispens疫苗免疫后雞群爆發(fā)馬立克病,發(fā)病率和死亡率高達(dá)30%和20%。進(jìn)行MDV的分離鑒定,評價現(xiàn)有疫苗株對臨床分離株的免疫保護(hù)效果,對我國MDV的防治有重要的參考意義。本試驗從該雞場分離到一株適應(yīng)DEF生長的馬立克病毒（MDV NC株）。對Meq基因測序分析,觀察病毒的遺傳變異；通過免疫保護(hù)實驗觀察CVI988/Rispens和HVT疫苗對NC株的保護(hù)效果。結(jié)果表明：Meq氨基酸分別在71、80、115、139、176位的突變符合國內(nèi)強(qiáng)毒MDV的突變特點。HVT疫苗組攻毒后31d開始發(fā)病,發(fā)病率為40%,死亡率為6.9%,腫瘤發(fā)生率為6.9%,對雞只的保護(hù)指數(shù)為58；CVI988/Rispens組發(fā)病率為51.7%,31d出現(xiàn)死亡,死亡高峰期為攻毒后41-... 

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
符號說明
第一部分 文獻(xiàn)綜述及選題的目的意義
    1. 馬立克病的研究進(jìn)展
        1.1 病原學(xué)概述
            1.1.1 MDV分類與血清型
            1.1.2 MDV形態(tài)與理化性質(zhì)
        1.2 MDV的基因組
            1.2.1 MDV基因組結(jié)構(gòu)
            1.2.2 MDV的相關(guān)致病基因
        1.3 MDV發(fā)病機(jī)理
            1.3.1 早期溶細(xì)胞階段
            1.3.2 潛伏感染
            1.3.3 第二次溶細(xì)胞性感染期
            1.3.4 轉(zhuǎn)化,腫瘤形成期
        1.4 MD流行病學(xué)
        1.5 臨床癥狀和病理變化
            1.5.1 神經(jīng)型
            1.5.2 內(nèi)臟型
            1.5.3 眼型
            1.5.4 皮膚型
        1.6 診斷技術(shù)
            1.6.1 病毒分離
            1.6.2 血清學(xué)實驗
            1.6.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)
            1.6.4 DNA探針診斷
            1.6.5 實時熒光定量
        1.7 防控
            1.7.1 疫苗防控
            1.7.2 疫苗失敗原因
            1.7.3 抗病育種
    2 研究的目的意義
第二部分 實驗研究
    1. 材料
        1.1 病毒
        1.2 SPF雞、雞胚、鴨胚
        1.3 載體與受體菌
        1.4 主要試劑
        1.5 主要儀器設(shè)備
        1.6 試劑配制
        1.7 引物設(shè)計
    2. 方法
        2.1 病料檢測
            2.1.1 病料來源
            2.1.2 淋巴細(xì)胞分離
            2.1.3 外周淋巴細(xì)胞總DNA提取
            2.1.4 樣品PCR檢測
        2.2 病毒分離與鑒定
            2.2.1 鴨胚成纖維細(xì)胞制備
            2.2.2 細(xì)胞接毒和傳代
            2.2.3 細(xì)胞收毒
            2.2.4 病毒的亞克隆
            2.2.5 分離株滴度測定
        2.3 Meq基因的序列測定分析
            2.3.1 PCR反應(yīng)體系與條件
            2.3.2 DNA膠回收
            2.3.3 目的基因與pMD19-T載體連接
            2.3.4 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
            2.3.5 重組質(zhì)粒的篩選和鑒定
        2.4 免疫保護(hù)實驗
        2.5 指標(biāo)測定
        2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    3 結(jié)果和分析
        3.1 PCR檢測結(jié)果
        3.2 NC株的分離培養(yǎng)和滴度測定
        3.3 致病基因Meq的擴(kuò)增和序列分析
            3.3.1 Meq基因的PCR擴(kuò)增
            3.3.2 Meq基因的序列分析
        3.4 MDV疫苗免疫保護(hù)實驗結(jié)果
            3.4.1 發(fā)病率
            3.4.2 死亡率
            3.4.3 腫瘤發(fā)生率
            3.4.4 疫苗的保護(hù)指數(shù)
            3.4.5 體重變化
            3.4.6 外周淋巴細(xì)胞帶毒檢測結(jié)果
            3.4.7 羽毛囊?guī)Ф緳z測結(jié)果
    4. 討論
        4.1 MDV NC株Meq基因
        4.2 MDV NC株毒力檢測及CVI988/Rispens疫苗的保護(hù)力
        4.3 雞外周血和羽毛囊中MDV的帶毒規(guī)律
        4.4 腫瘤的體內(nèi)分布
    5. 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號：3660146