為進(jìn)一步研究豬流行性腹瀉病毒（PEDV）感染細(xì)胞的機(jī)制,本研究利用病毒鋪覆蛋白印跡技術(shù)（VOPBA）和質(zhì)譜（MS）技術(shù)篩選細(xì)胞內(nèi)與PEDV相互作用的蛋白,初步鑒定細(xì)胞內(nèi)源性蛋白甘露糖-6-磷酸/胰島素樣生長因子II受體（M6P/IGF2R）為候選蛋白。結(jié)果證實(shí)M6P/IGF2R蛋白與PEDV S2蛋白相互作用且在細(xì)胞內(nèi)存在共定位現(xiàn)象,過表達(dá)M6P/IGF2R能夠促進(jìn)PEDV增殖,干擾M6P/IGF2R能夠抑制PEDV增殖。PEDV S2蛋白通過與宿主細(xì)胞M6P/IGF2R蛋白互作促進(jìn)PEDV侵入細(xì)胞,該結(jié)論為進(jìn)一步開展PEDV與宿主細(xì)胞蛋白相互作用機(jī)制研究提供了重要理論依據(jù)。 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 病毒、細(xì)胞和質(zhì)粒
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
    1.2 方法
        1.2.1 病毒鋪覆蛋白結(jié)合試驗(yàn)(VOPBA)
        1.2.2 重組質(zhì)粒構(gòu)建
        1.2.3 Western blot
        1.2.4 siRNA干擾試驗(yàn)
        1.2.5 激光共聚焦試驗(yàn)
        1.2.6 病毒吸附試驗(yàn)
        1.2.7 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 VOPBA篩選受體相關(guān)蛋白
    2.2 Western blot分析M6P/IGF2R1～3表達(dá)情況
    2.3 siRNA干擾M6P/IGF2R表達(dá)
    2.4 激光共聚焦顯微鏡觀察M6P/IGF2R與PEDV在細(xì)胞中表達(dá)共定位
    2.5 M6P/IGF2R對病毒吸附的影響
        2.5.1 過表達(dá)M6P/IGF2R促進(jìn)PEDV吸附Vero E6細(xì)胞
        2.5.2 干擾M6P/IGF2R抑制PEDV吸附IPEC-J2細(xì)胞
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬腸道冠狀病毒與入侵受體氨基肽酶N的相互作用[J]. 劉炎,黃耀偉.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2019(09)
[2]1株豬流行性腹瀉病毒S基因的克隆及序列分析[J]. 周如月,劉琪,甘振磊,賈愛卿,王貴平.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2017(12)

博士論文
[1]豬流行性腹瀉病毒纖突蛋白在病毒入侵和免疫反應(yīng)中的作用研究[D]. 孫彥剛.吉林大學(xué) 2019
[2]豬流行性腹瀉病毒血清學(xué)與抑制病毒入侵細(xì)胞的研究[D]. 雷喜梅.浙江大學(xué) 2018
[3]登革Ⅱ型病毒EDⅢ與登革病毒受體蛋白的鑒定及功能評價[D]. 楊永紅.南方醫(yī)科大學(xué) 2014
[4]甘露糖-6-磷酸受體在惡性腫瘤免疫治療聯(lián)合化療中的作用[D]. 黃純.天津醫(yī)科大學(xué) 2012

碩士論文
[1]趨化因子在豬流行性腹瀉病毒感染中的作用[D]. 孫立旦.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]豬流行性腹瀉病毒S基因在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)及其單克隆抗體的制備[D]. 楊德強(qiáng).中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017
[3]豬整合素αvβ3真核表達(dá)載體構(gòu)建及介導(dǎo)PEDV感染作用的初步驗(yàn)證[D]. 高晶.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2016



本文編號：3656116