金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）是一種寄生于動(dòng)物體表的條件性致病菌,能引起人和多種動(dòng)物的感染性疾病,如心內(nèi)膜炎、肺炎、骨髓炎和菌血癥等。此外,S.aureus還可引起哺乳期婦女和動(dòng)物的乳腺炎,嚴(yán)重威脅人類健康和畜牧業(yè)健康發(fā)展。S.aureus耐藥菌株的涌現(xiàn)和疫苗預(yù)防效果的局限性使得深入研究其發(fā)病的免疫學(xué)機(jī)制已迫在眉睫。目前,S.aureus乳腺感染的相關(guān)免疫調(diào)控機(jī)制并不完全清楚,最新研究表明,一些非傳統(tǒng)的T細(xì)胞群（如γδT細(xì)胞）參與了病原微生物感染的免疫應(yīng)答,并且在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)類型和強(qiáng)度上發(fā)揮重要作用。γδT細(xì)胞作為連接固有免疫應(yīng)答與適應(yīng)性免疫應(yīng)答的橋梁,廣泛分布于各種黏膜和皮下組織,在黏膜免疫防御中扮演著重要的角色。有研究表明,γδT細(xì)胞對(duì)細(xì)菌感染的免疫應(yīng)答因感染部位的不同而存在著差異。乳腺作為機(jī)體的特殊組織器官,在感染S.aureus后,乳腺組織中γδT細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化如何?發(fā)揮怎樣的功能?具體機(jī)制如何?尚未見報(bào)道。本研究通過S.aureus感染小鼠乳腺模型,系統(tǒng)分析乳腺組織中γδT細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化、應(yīng)答規(guī)律和分泌細(xì)胞因子特征;利用TCRδ<... 

【文章頁數(shù)】：150 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 金黃色葡萄球菌感染與免疫逃逸
        1.1.1 金黃色葡萄球菌概述
        1.1.2 金黃色葡萄球菌感染的發(fā)病機(jī)制
        1.1.3 宿主對(duì)S.aureus的防御策略
        1.1.4 金黃色葡萄球菌的免疫逃逸策略
    1.2 S.aureus乳腺炎研究進(jìn)展
        1.2.1 乳腺發(fā)育及結(jié)構(gòu)
        1.2.2 乳腺的免疫應(yīng)答
        1.2.3 金黃色葡萄球菌乳腺炎
        1.2.4 金黃色葡萄球菌乳腺炎的治療
    1.3 γδT細(xì)胞在感染性疾病中的作用
        1.3.1 γδT細(xì)胞概述
        1.3.2 γδT細(xì)胞亞型及分布
        1.3.3 γδT細(xì)胞的抗原識(shí)別與活化
        1.3.4 產(chǎn)IL-17的γδT細(xì)胞
        1.3.5 產(chǎn)IFN-γ的 γδT 細(xì)胞
        1.3.6 γδT細(xì)胞在感染性疾病中的功能
    1.4 本課題的研究?jī)?nèi)容和意義
第二章 γδT細(xì)胞在S.aureus感染中的應(yīng)答特征研究
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 菌株
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 S.aureus ATCC27543 菌株活化
        2.2.2 S.aureus小鼠乳腺感染模型的建立
        2.2.3 臨床觀察
        2.2.4 乳腺內(nèi)S.aureus數(shù)量檢測(cè)
        2.2.5 乳腺組織切片的制備與觀察
        2.2.6 qPCR檢測(cè)乳腺內(nèi)細(xì)胞因子
        2.2.7 ELLISA檢測(cè)炎性細(xì)胞因子變化情況
        2.2.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)γδT細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化情況
        2.2.9 免疫熒光檢測(cè)乳腺組織中γδT細(xì)胞變化情況
        2.2.10 γδT細(xì)胞表型檢測(cè)
        2.2.11 胞內(nèi)細(xì)胞因子染色
        2.2.12 統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 S.aureus小鼠乳腺感染模型的建立
        2.3.2 乳腺中γδT 細(xì)胞數(shù)量在S.aureus感染早期迅速升高
        2.3.3 小鼠脾臟中免疫細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化結(jié)果
        2.3.4 乳腺組織中細(xì)胞因子IL-17A、IL-23及IFN-γ的表達(dá)量顯著增加
        2.3.5 S.aureus感染過程中γδT 細(xì)胞高表達(dá)CD44和CD69
        2.3.6 乳腺中γδT細(xì)胞是IL-17A和 IFN-γ的主要來源細(xì)胞
    2.4 討論
第三章 γδT細(xì)胞在S.aureus感染中的功能研究
    3.1 材料與設(shè)備
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 菌株
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 乳腺S.aureus定殖量檢測(cè)
        3.2.2 乳腺病理切片制備與觀察
        3.2.3 乳腺組織MPO及趨化因子KC、MIP2和IL-8 檢測(cè)
        3.2.4 乳腺組織嗜中性粒細(xì)胞檢測(cè)
        3.2.5 乳腺組織中細(xì)胞因子的檢測(cè)
        3.2.6 乳腺組織T淋巴細(xì)胞檢測(cè)
        3.2.7 統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 敲除γδT 細(xì)胞后乳腺組織中S.aureus定殖量顯著增加
        3.3.2 敲除γδT細(xì)胞后乳腺組織病變程度加劇
        3.3.3 敲除γδT細(xì)胞后趨化因子表達(dá)量及嗜中性粒細(xì)胞數(shù)量顯著減少
        3.3.4 敲除γδT 細(xì)胞后乳腺組織MPO活性降低
        3.3.5 敲除γδT 細(xì)胞后乳腺組織中IL-17A和 IFN-γ表達(dá)量降低
        3.3.6 敲除γδT細(xì)胞后Th1型細(xì)胞數(shù)量減少
        3.3.7 敲除γδT細(xì)胞對(duì)Th2型細(xì)胞數(shù)量無顯著影響
        3.3.8 敲除γδT細(xì)胞后Th17型細(xì)胞數(shù)量減少
        3.3.9 敲除γδT細(xì)胞后Tc型細(xì)胞數(shù)量減少
        3.3.10 敲除γδT 細(xì)胞后Treg細(xì)胞數(shù)量減少
    3.4 討論
第四章 γδT 細(xì)胞在S.aureus感染中的作用機(jī)制研究
    4.1 材料與設(shè)備
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 菌株
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要儀器設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 Vγ1和Vγ4γδT細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化檢測(cè)
        4.2.2 Vγ1和Vγ4γδT細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)
        4.2.3 小鼠乳腺內(nèi)Vγ1和Vγ4γδT 細(xì)胞清除
        4.2.4 Vγ1和Vγ4γδT 細(xì)胞清除后乳腺組織細(xì)菌定殖量檢測(cè)
        4.2.5 Vγ1和Vγ4γδT 細(xì)胞清除后乳腺組織嗜中性粒細(xì)胞檢測(cè)
        4.2.6 Vγ1和Vγ4γδT 細(xì)胞清除后乳腺組織細(xì)胞因子檢測(cè)
        4.2.7 Vγ1和Vγ4γδT 細(xì)胞清除后胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)
        4.2.8 IL-17A~(-/-)小鼠乳腺S.aureus數(shù)量檢測(cè)
        4.2.9 IL-17A~(-/-)小鼠乳腺病理切片制備與觀察
        4.2.10 IL-17A~(-/-)小鼠乳腺組織MPO及趨化因子KC、MIP-2和IL-8 檢測(cè)
        4.2.11 IL-17A~(-/-)小鼠乳腺組織嗜中性粒細(xì)胞檢測(cè)
        4.2.12 統(tǒng)計(jì)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 S.aureus感染過程中乳腺Vγ1和Vγ4γδT細(xì)胞數(shù)量顯著升高
        4.3.2 乳腺Vγ1γδT 細(xì)胞主要產(chǎn)生IFN-γ
        4.3.3 乳腺Vγ4γδT細(xì)胞主要產(chǎn)生IL-17A
        4.3.4 小鼠乳腺內(nèi)Vγ1和Vγ4γδT 細(xì)胞清除效果
        4.3.5 Vγ1和Vγ4γδT 細(xì)胞清除后乳腺內(nèi)細(xì)菌定殖量顯著增加
        4.3.6 Vγ1和Vγ4γδT 細(xì)胞清除后乳腺嗜中性粒細(xì)胞數(shù)量顯著降低
        4.3.7 Vγ1γδT 細(xì)胞清除后乳腺組織中IFN-γ表達(dá)量顯著降低
        4.3.8 Vγ4γδT 細(xì)胞清除后乳腺組織中IL-17A表達(dá)量顯著降低
        4.3.9 IL-17A基因敲除小鼠乳腺S.aureus定殖量增加
        4.3.10 IL-17A基因敲除后乳腺病變程度加劇
        4.3.11 IL-17A基因敲除后乳腺趨化因子表達(dá)量及嗜中性粒細(xì)胞數(shù)量顯著降低
        4.3.12 IL-17A基因敲除后乳腺組織MPO活性降低
    4.4 討論
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)及展望
參考文獻(xiàn)
致謝
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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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