瘋草（locoweed）是豆科黃芪屬（Astragalus）和棘豆屬（Oxytropis）有毒植物的總稱，在世界范圍內(nèi)廣泛分布，動物采食后會導(dǎo)致嚴(yán)重的瘋草�。╨ocoism），極大地危害了草原畜牧業(yè)的發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，瘋草中的主要有毒成分是苦馬豆素（1，2，8-trihyroxyindolizidine，swainsonine，SW）。妊娠山羊采食含有SW的植物后，引起胎盤發(fā)育遲緩、充血，胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞發(fā)生病變，并最終導(dǎo)致妊娠山羊流產(chǎn)。胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞在胚胎發(fā)育和胎盤形成過程中發(fā)揮著重要作用，一些病原和有毒物質(zhì)引起的胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致滋養(yǎng)層細(xì)胞病變和動物流產(chǎn)的主要原因。本研究以山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞為研究模型，檢測SW對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的細(xì)胞周期和侵襲特性的影響，探索SW誘導(dǎo)山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，以期揭示SW損傷妊娠山羊胎盤并導(dǎo)致山羊流產(chǎn)的分子機制。研究取得以下結(jié)果。1.采集妊娠45～60d的薩能奶山羊胎盤組織，無菌條件下分離、純化得到了原代山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞。原代山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞貼壁后呈不規(guī)則多邊形，細(xì)胞長滿單層后呈典型的鋪路石狀，具有接觸抑制的生長特點。純化得到的... 

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
文獻(xiàn)綜述
    第一章 胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的研究進(jìn)展
        1.1 滋養(yǎng)層細(xì)胞的功能
            1.1.1 滋養(yǎng)層細(xì)胞與妊娠識別
            1.1.2 滋養(yǎng)層細(xì)胞與胚胎附植
            1.1.3 滋養(yǎng)層細(xì)胞與胎盤形成
        1.2 胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的體外培養(yǎng)
            1.2.1 胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的分離
            1.2.2 胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的純化
        1.3 胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的鑒定
        1.4 胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的永生化
            1.4.1 端粒（Telomere）和端粒酶（Telomerase）的發(fā)現(xiàn)
            1.4.2 端粒和端粒酶的結(jié)構(gòu)與功能
            1.4.3 端粒酶與細(xì)胞衰老、永生化
    第二章 胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞與細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展
        2.1 細(xì)胞凋亡的生物學(xué)特征
        2.2 細(xì)胞凋亡調(diào)控的分子基礎(chǔ)
            2.2.1 Caspase 家族
            2.2.2 Bax/Bcl-2 蛋白家族
        2.3 細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
            2.3.1 死亡受體通路
            2.3.2 線粒體通路
        2.4 胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞與細(xì)胞凋亡
            2.4.1 內(nèi)源性調(diào)控因素
            2.4.2 外源性調(diào)控因素
            2.4.3 單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞
        2.5 苦馬豆素與細(xì)胞凋亡
            2.5.1 苦馬豆素和家畜中毒
            2.5.2 苦馬豆素的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用
        2.6 本研究的目的和意義
試驗研究
    第三章 永生化山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞系的建立及生物學(xué)特性分析
        3.1 材料
            3.1.1 菌種和細(xì)胞
            3.1.2 組織和試驗動物
            3.1.3 主要試劑
            3.1.4 試驗所用溶液及其配制
            3.1.5 主要儀器
        3.2 方法
            3.2.1 山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的分離培養(yǎng)
            3.2.2 山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的鑒定
            3.2.3 hTERT 基因轉(zhuǎn)染原代山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞
            3.2.4 轉(zhuǎn)染后山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的鑒定
            3.2.5 外源性 hTERT 基因在轉(zhuǎn)染后山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞中的表達(dá)
            3.2.6 山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞生物學(xué)特性的分析
            3.2.7 統(tǒng)計學(xué)分析
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 原代山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的分離
            3.3.2 pCI-neo-hTERT 質(zhì)粒的鑒定
            3.3.3 G418 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞最佳篩選濃度的確定
            3.3.4 轉(zhuǎn)染后陽性細(xì)胞的擴大培養(yǎng)
            3.3.5 山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的形態(tài)特征
            3.3.6 山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的鑒定
            3.3.7 hTERT 基因在山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞中的表達(dá)
            3.3.8 山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的生長特性
            3.3.9 山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞激素分泌功能的檢測
            3.3.10 體外培養(yǎng)的山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞具有侵襲性
            3.3.11 軟瓊脂克隆形成試驗
            3.3.12 裸鼠致瘤性試驗
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 苦馬豆素對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞遷移和侵襲功能的影響
        4.1 材料
            4.1.1 SW 與細(xì)胞
            4.1.2 主要試劑
            4.1.3 試驗所用溶液及其配制
            4.1.4 主要儀器
        4.2 方法
            4.2.1 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞活性的影響
            4.2.2 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞細(xì)胞周期的影響
            4.2.3 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞黏附能力的影響
            4.2.4 細(xì)胞遷移試驗
            4.2.5 細(xì)胞侵襲試驗
            4.2.6 Western blot 檢測
            4.2.7 統(tǒng)計學(xué)分析
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞活性的影響
            4.3.2 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞細(xì)胞周期的影響
            4.3.3 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞周期蛋白的影響
            4.3.4 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞黏附能力的影響
            4.3.5 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞遷移能力的影響
            4.3.6 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲能力的影響
            4.3.7 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞 MT1-MMP、MMP-2 和 TIMP-2 的影響
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
    第五章 苦馬豆素誘導(dǎo)山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        5.1 材料
            5.1.1 SW 與細(xì)胞
            5.1.2 主要試劑
            5.1.3 試驗所用溶液及其配制
            5.1.4 主要儀器
        5.2 方法
            5.2.1 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞活性的影響
            5.2.2 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞形態(tài)的影響
            5.2.3 DNA 片段化分析
            5.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡率的影響
            5.2.5 蛋白濃度檢測
            5.2.6 Caspase 活性檢測
            5.2.7 Western blot 檢測
            5.2.8 TUNEL 試驗
            5.2.9 統(tǒng)計學(xué)分析
        5.3 結(jié)果
            5.3.1 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞活性的影響
            5.3.2 SW 誘導(dǎo)山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)觀察
            5.3.3 DNA 片段化分析
            5.3.4 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡率的影響
            5.3.5 Caspase 級聯(lián)反應(yīng)在 SW 誘導(dǎo)山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡中的作用
            5.3.6 Caspase 抑制劑對 SW 誘導(dǎo)的山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡的影響
            5.3.7 SW 對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞 Fas 和 FasL 表達(dá)的影響
            5.3.8 SW 促進(jìn)山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞中 Bax/Bcl-2 比值升高
            5.3.9 SW 促進(jìn)山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞線粒體中 Cytochrome c 的釋放
            5.3.10 SW 選擇性誘導(dǎo)妊娠山羊胎盤組織中滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
結(jié)論與創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
縮略詞和中英文對照表
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3650328