Hedgehog（Hh）信號通路是動物機體生長發(fā)育以及維持正常生命活動所不可缺少的一個信號通路，幾乎所有動物組織其正常功能的發(fā)揮都離不開這一通路的調控。在多種中胚層來源的細胞中的研究也表明，Hh信號通路對于這些細胞的增殖及分化有著重要的調控作用。肉牛肌肉的生長狀態(tài)及結構直接影響著牛肉的產量和肉質，而肌肉中的衛(wèi)星細胞（MuSC）作為出生后肌肉生長和損傷修復的后備力量，它的活動和活力對于肌肉生長發(fā)育有著很關鍵的作用。本文即通過檢測體內肌肉組織的基因表達量和檢測體外的MuSC的增殖及分化相關活動，研究Hh信號通路在肌肉組織及細胞中的表達情況，并通過Hh信號通路的抑制劑cyclopamine和激動劑purmorphamine研究Hh信號通路的活性對于MuSC增殖和分化的影響。在本研究中，采用熒光實時定量PCR的方法檢測了秦川牛各組織中、肌肉來源的各種細胞中以及MuSC增殖和分化過程中相關基因的相對表達水平；通過細胞流式技術等檢測了MuSC的增殖程度和細胞周期的比例；通過分別使用含2%馬血清的培養(yǎng)液和含有胰島素等藥物的培養(yǎng)液對分離的牛MuSC進行了成肌和成脂誘導；另外還通過腺病毒介導的C/EBP... 

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1. HEDGEHOG（HH）信號通路
        1.1.1. 概述
        1.1.2. Hh 信號通路的傳導途徑（圖 1‐1）
        1.1.3. Hh 信號通路的主要功能
        1.1.4. Hh 信號通路與其它信號或因子的關系
        1.1.5. Hh 信號通路的調節(jié)物
    1.2. 肌肉衛(wèi)星細胞
        1.2.1. 肌肉的發(fā)育規(guī)律
        1.2.2. 肌肉衛(wèi)星細胞的地位和作用
        1.2.3. 肌肉衛(wèi)星細胞相關的信號因子和基因調節(jié)
        1.2.4. 肌肉衛(wèi)星細胞與肉牛生產
    1.3. HH 信號通路對細胞增殖及分化的調控研究
        1.3.1. Hh 信號通路與細胞增殖
        1.3.2. Hh 信號通路與中胚層來源的細胞的分化
    1.4. 本研究的目的和意義
第二章 HH 信號通路成員在牛不同組織的特異性表達分析
    2.1. 材料與方法
        2.1.1. 樣品采集
        2.1.2. 組織中總 RNA 提取
        2.1.3. 反轉錄 PCR
        2.1.4. 熒光實時定量 PCR
        2.1.5. 數據統(tǒng)計及分析
    2.2. 結果分析
        2.2.1. Ptch1 基因在牛各組織中的表達情況
        2.2.2. Smo 基因在牛各組織中的表達情況
        2.2.3. Gli1 基因在牛各組織中的表達情況
        2.2.4. Gli2 基因在牛各組織中的表達情況
    2.3. 討論
    2.4. 小結
第三章 牛肌肉衛(wèi)星細胞的分離培養(yǎng)及鑒定
    3.1. 材料與方法
        3.1.1. 牛 MuSC 的原代分離及培養(yǎng)
        3.1.2. 細胞免疫熒光鑒定
        3.1.3. 細胞中總 RNA 的提取
        3.1.4. 反轉錄 PCR
        3.1.5. 熒光實時定量 PCR
        3.1.6. 數據統(tǒng)計及分析
    3.2. 結果分析
        3.2.1. 根據貼壁能力分離出不同的細胞類群
        3.2.2. 免疫細胞化學鑒定結果
        3.2.3. Hh 通路成員在牛肌肉來源的不同細胞類群中的表達情況
    3.3. 討論
        3.3.1 肌肉組織原代細胞的分離和鑒定
        3.3.2 各細胞類群中 Hh 信號通路成員的表達情況
    3.4. 小結
第四章 HH 信號通路對牛肌肉衛(wèi)星細胞增殖的影響
    4.1. 材料與方法
        4.1.1. 生長曲線的繪制
        4.1.2. 細胞周期的檢測
        4.1.3. 細胞中總 RNA 的提取
        4.1.4. 反轉錄 PCR
        4.1.5. 熒光實時定量 PCR
        4.1.6. 數據統(tǒng)計及分析
    4.2. 結果分析
        4.2.1. Cyclopamine 濃度對生長曲線的影響
        4.2.2. 細胞周期的流式檢測結果
        4.2.3. 細胞周期蛋白的基因表達情況
    4.3. 討論
    4.4. 小結
第五章 HH 信號通路對牛肌肉衛(wèi)星細胞成肌分化的作用研究
    5.1. 材料與方法
        5.1.1. 牛 MuSC 的成肌分化
        5.1.2. 細胞中總 RNA 的提取
        5.1.3. 反轉錄 PCR
        5.1.4. 熒光實時定量 PCR
        5.1.5. 數據統(tǒng)計及分析
    5.2. 結果分析
        5.2.1. 不同濃度 cyclopamine 對牛 MuSC 成肌分化的影響
        5.2.2. Hh 信號通路激動劑 purmorphamine 牛肌肉衛(wèi)星細胞成肌分化的影響
    5.3. 討論
        5.3.1. 在成肌分化過程中 Hh 信號通路的變化情況
        5.3.2. 肌肉細胞成肌分化的發(fā)生
        5.3.3. 成肌分化過程中相關因子的基因表達
    5.4. 小結
第六章 HH 信號通路對牛肌肉衛(wèi)星細胞成脂分化的作用研究
    6.1. 材料與方法
        6.1.1. 通過過表達誘導牛 MuSC 的成脂分化
        6.1.2. 含胰島素的誘導液誘導牛 MuSC 的成脂分化
        6.1.3. 細胞中總 RNA 的提取
        6.1.4. 反轉錄 PCR
        6.1.5. 熒光實時定量 PCR
        6.1.6. 數據統(tǒng)計及分析
    6.2. 結果分析
        6.2.1. 過表達 C/EBPα誘導牛 MuSC 成脂分化過程中 Hh 信號通路組分的表達情況
        6.2.2. 過表達 ADIG 誘導牛 MuSC 成脂分化過程中 Hh 信號通路組分的表達情況
        6.2.3. 不同濃度 Cyclopamine 對牛肌肉衛(wèi)星細胞成脂分化的影響
        6.2.4. Hh 信號通路激動劑 Purmorphamine 牛肌肉衛(wèi)星細胞成脂分化的影響
    6.3. 討論
        6.3.1. 牛 MuSC 成脂過程中 Hh 信號通路的變化情況
        6.3.2. 成脂過程中相關因子的作用關系
        6.3.3. Hh 信號對于牛 MuSC 成脂的影響
    6.4. 小結
第七章 結論及創(chuàng)新點
    （一）結論
    （二）創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
    一、所用到的主要儀器設備
    二、所用到的主要試劑及耗材
    三、總 RNA 的提取
    四、反轉錄 PCR
    五、熒光實時定量 PCR
縮略詞
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3649737