胚胎在體外培養(yǎng)的發(fā)育過程中,在形態(tài)、基因表達(dá)和發(fā)育能力方面不能夠達(dá)到胚胎在雌性生殖道內(nèi)的發(fā)育的水平,因此優(yōu)化培養(yǎng)液成分仍然是非常迫切需要。牛胚胎體外培養(yǎng)時(shí),需要培養(yǎng)7天發(fā)育到囊胚,然后進(jìn)行胚胎移植。通常采用第3.5天更換胚胎培養(yǎng)液,然而更換培養(yǎng)液對胚胎的影響仍然不清楚。采用超速離心法提取胚胎培養(yǎng)液中的外泌體,采用投射電子顯微鏡和免疫熒光染色外泌體特異性蛋白CD9鑒定外泌體,發(fā)現(xiàn)胚胎在體外培養(yǎng)過程中能夠分泌外泌體,換液會導(dǎo)致胚胎分泌外泌體丟失。用30μL新鮮培養(yǎng)液重懸從10mL第3.5天胚胎培養(yǎng)液提取的外泌體。將不同量（1μL、5μL和10μL）的胚胎外泌體提取物添加到胚胎培養(yǎng)液中,添加5μL和10μL外泌體提取物能夠顯著提高胚胎體外發(fā)育的囊胚率。將胚胎分為三組培養(yǎng),分別是換液組（第3.5天換液）、不換液組（全程不換液）和外泌體添加組（第3.5天換液并添加5μL外泌體提取物）�；虮磉_(dá)結(jié)果表明換液影響胚胎發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、凋亡和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層細(xì)胞分化。添加外泌組的Oct4基因的表達(dá)水平顯著高于換液組,這表明換液導(dǎo)致丟失的胚胎分泌的外泌體在內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層細(xì)胞分化過程中發(fā)揮重要的作用。本研... 

【文章頁數(shù)】：36 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 綜述
    1.1 牛繁殖關(guān)鍵技術(shù)研究進(jìn)展
        1.1.1 人工授精
        1.1.2 超數(shù)排卵與胚胎收集
        1.1.3 胚胎移植
        1.1.4 胚胎培養(yǎng)
        1.1.5 基因編輯技術(shù)
        1.1.6 體細(xì)胞核移植
    1.2 外泌體研究進(jìn)展
        1.2.1 外泌體的生理作用
        1.2.2 外泌體在疾病發(fā)生中的作用
        1.2.3 外泌體在診斷中的作用
        1.2.4 外泌體在治療中的作用
        1.2.5 外泌體的分離純化和儲存
第二章 體外培養(yǎng)胚胎分泌外泌體的分離與鑒定
    2.1 試驗(yàn)材料與方法
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 試驗(yàn)方法
    2.2 試驗(yàn)結(jié)果
        2.2.1 核移植胚胎體外培養(yǎng)分泌外泌體的電鏡結(jié)構(gòu)
        2.2.2 核移植胚胎體外培養(yǎng)分泌外泌體的免疫熒光檢測
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 體外培養(yǎng)胚胎分泌外泌體對核移植胚胎發(fā)育的影響
    3.1 試驗(yàn)材料與方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 試驗(yàn)方法
    3.2 試驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 不同量的外泌體對核移植胚胎囊胚率的影響
        3.2.2 換液、不換液和添加外泌體對核移胚胎基因表達(dá)的影響
        3.2.3 換液、不換液和添加外泌體對核移胚胎體外培養(yǎng)囊胚率的影響
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]國外奶牛繁殖技術(shù)產(chǎn)業(yè)化研究進(jìn)展[J]. 滑國華,楊利國.  中國奶牛. 2012(05)
[2]牛胎兒成纖維細(xì)胞β-防御素（hBD3）基因轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)基因克隆胚制備[J]. 馬晶晶,王勇勝,何小寧,鄭月茂,張涌.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2010(04)
[3]亮甲酚藍(lán)染色法篩選卵母細(xì)胞對牛體細(xì)胞克隆胚體外發(fā)育的影響[J]. 曹澤磊,蘇建民,胡廣衛(wèi),王勇勝,唐爽,張涌.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2009(09)
[4]轉(zhuǎn)基因牛研究進(jìn)展[J]. 崔文濤.  中國畜牧獸醫(yī). 2007(07)
[5]提高牛人工授精受胎率技術(shù)[J]. 伍麗仙.  中國牛業(yè)科學(xué). 2006(06)
[6]牛精液冷凍技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 胡傳活,胡傳水,梁興偉,盧克煥.  廣西科學(xué). 2004(04)
[7]牛分離精子對體外受精的影響[J]. 張明,盧克煥,G.E.Seidel,Jr.  廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué). 2002(04)
[8]動物性別控制研究現(xiàn)狀[J]. 梁明振,盧克煥.  上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2002(04)
[9]哺乳動物性別控制研究進(jìn)展[J]. 盧克煥.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2002(04)
[10]牛胚胎冷凍保存的研究進(jìn)展[J]. 蔡令波,王鋒.  四川畜牧獸醫(yī). 2001(12)



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