禽流感是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要疫病，尤其是H9亞型低致病性禽流感病毒。由于該病毒感染一般不會造成禽類的大量死亡，只引起比較輕微的呼吸道癥狀，跟禽類其它的呼吸道疾病極為相似，因此具有極大的隱蔽性和欺騙性，更容易在雞群中蔓延。鑒于此，建立H9亞型低致病性禽流感的診斷方法就顯得格外重要。目前，禽流感的主要診斷方法為病毒分離、血凝及血凝抑制試驗、RT-PCR等，這些方法耗時長、操作復雜，不利于在基層推廣，無法滿足簡單、快速、準確診斷的要求。環(huán)介導等溫擴增技術（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）是一種新型的核酸擴增方法，該方法僅需一個簡單的恒溫裝置，在幾十分鐘內就能夠完成核酸擴增反應。其最重要的特點就是擴增效率極高，反應時間也較短，且可以靠直接觀察擴增產物產生的沉淀來觀察擴增的結果。與傳統(tǒng)的PCR方法相比LAMP方法不需要復雜的溫度變化，長時間的溫度循環(huán)，以及瓊脂糖凝膠電泳紫外觀察等復雜過程，LAMP檢測方法很適合進行基層部門的快速檢測。本研究建立了H9亞型禽流感病毒的LAMP檢測方法并進行了初步應用，主要內容包括：1.本研究參考禽流感病毒的基質... 

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
符號說明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 禽流感的概述
        1.1.1 禽流感的病原學
        1.1.2 禽流感的流行病學
        1.1.3 禽流感的危害
        1.1.4 禽流感疫情
        1.1.5 公共衛(wèi)生學
        1.1.6 禽流感的預防
        1.1.7 禽流感診斷檢測技術進展
    1.2 環(huán)介導等溫擴增(LAMP)檢測方法的概述
        1.2.1 LAMP 反應引物的設計
        1.2.2 LAMP 反應的原理
        1.2.3 LAMP 反應結果的判定
        1.2.4 LAMP 檢測方法的實踐應用
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 主要溶液及培養(yǎng)基的配制
    2.2 方法
        2.2.1 LAMP 反應的初步建立
        2.2.2 H9 亞型禽流感病毒的排毒規(guī)律
        2.2.3 對排毒毒株的克隆測序分析
3 結果與分析
    3.1 LAMP 反應的初步建立
        3.1.1 LAMP 反應體系的初步建立
        3.1.2 LAMP 引物的選取
        3.1.3 LAMP 反應溫度的確定
        3.1.4 LAMP 反應的敏感性試驗
        3.1.5 LAMP 反應的特異性試驗
    3.2 排毒規(guī)律試驗結果
        3.2.1 各個毒株的血凝價
        3.2.2 第一次攻毒試驗
        3.2.3 測定病毒的 EID50
        3.2.4 攻毒試驗
        3.2.5 排毒情況
        3.2.6 對排毒試驗棉拭子樣品的檢測
    3.3 對排毒毒株的克隆測序
        3.3.1 RT-PCR 結果
        3.3.2 病毒的克隆測序
        3.3.3 序列分析
4 討論
    4.1 LAMP 反應的初步建立
    4.2 H9 亞型禽流感病毒的排毒規(guī)律
結論
參考文獻
致謝
攻讀學位期間發(fā)表論文情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]禽流感病毒跨種傳播機制的研究進展[J]. 許晨.  科學. 2012(01)
[2]建立禽流感H7和H9亞型熒光定量PCR檢測方法[J]. 王秋泉,黃平,胡守旺,高秀潔,楊杏芬,李杰.  第三軍醫(yī)大學學報. 2010(03)
[3]環(huán)介導恒溫擴增法（LAMP）檢測金黃色葡萄球菌[J]. 李永剛,王德國,武建剛,霍貴成.  食品工業(yè)科技. 2010(01)
[4]豬呼吸與繁殖綜合癥病毒RT-LAMP檢測方法的建立[J]. 鑫婷,侯紹華,賈紅,郭曉宇,丁家波,李延鵬,丁敏,朱鴻飛.  中國農業(yè)科學. 2010(01)
[5]高致病性禽流感通用和H5亞型熒光定量PCR方法的建立[J]. 黃平,胡守旺,王秋泉,楊杏芬,高秀潔,李杰.  第四軍醫(yī)大學學報. 2009(23)
[6]豬瘟病毒野毒株RT-LAMP可視化檢測方法的建立[J]. 張興娟,孫元,劉大飛,仇華吉.  中國預防獸醫(yī)學報. 2009(11)
[7]LAMP檢測單核細胞增生性李斯特氏菌的研究[J]. 袁耀武,張亞爽,馬曉燕,張偉.  中國食品學報. 2009(03)
[8]禽流感病毒分型基因芯片的研制[J]. 韓雪清,林祥梅,侯義宏,吳紹強,劉建,梅琳,賈廣樂,楊澤曉.  微生物學報. 2008(09)
[9]H9亞型禽流感病毒間接免疫熒光檢測方法的建立與比較[J]. 白泉陽,孫穎杰,鄭騰,張伯強,趙興存,王武軍,張志燈,張體銀.  福建農業(yè)學報. 2008(02)
[10]口蹄疫病毒RT-LAMP檢測方法的建立[J]. 秦智鋒,曾少靈,阮周曦,陳兵,曹琛福,花群義,呂建強,葉奕優(yōu),范萬紅,畢英佐.  中國預防獸醫(yī)學報. 2008(05)

碩士論文
[1]環(huán)介導等溫核酸擴增（LAMP）技術檢測嬰兒配方奶粉中阪崎腸桿菌的研究[D]. 胡連霞.河北農業(yè)大學 2009



本文編號：3645947