DNA疫苗與傳統(tǒng)疫苗相比,具有明顯的優(yōu)勢(shì)。但由于DNA為生物大分子,難以被細(xì)胞直接攝入,而且核酸容易降解。因此“裸”DNA疫苗難以被抗原提呈細(xì)胞攝入、表達(dá)及抗原遞呈,導(dǎo)致免疫應(yīng)答水平較低,其推廣使用受到限制。細(xì)菌菌影（bacterial ghosts,BGs）是裂解細(xì)菌細(xì)胞壁、去除細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容物之后形成的細(xì)菌空殼。它具有完整的天然表面抗原,不僅能直接作為疫苗使用,還可以作為一種良好的載體。本研究利用干酪乳桿菌菌影作為包裝載體,分析其對(duì)DNA免疫效果的影響。首先,將質(zhì)粒pCI-EGFP和菌影裝載的pCI-EGFP分別與RAW264.7細(xì)胞和原代巨噬細(xì)胞混勻,未處理的巨噬細(xì)胞作為對(duì)照,通過熒光顯微鏡觀察。結(jié)果顯示:質(zhì)粒轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞和原代巨噬細(xì)胞后,只觀察到微弱的熒光,而菌影裝載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞和原代巨噬細(xì)胞后,可觀察到大量綠色熒光,表明EGFP在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中獲得了有效表達(dá)。同時(shí),通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,結(jié)果顯示:質(zhì)粒轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞和原代巨噬細(xì)胞后,陽(yáng)性細(xì)胞率分別為1.4%和1.8%,而菌影裝載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞和原代巨噬細(xì)胞后,陽(yáng)性細(xì)胞率分別為7... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 菌影的研究進(jìn)展
        1.1.1 菌影的制備
        1.1.2 菌影作為黏膜疫苗的研究進(jìn)展
        1.1.3 菌影作為疫苗佐劑的研究進(jìn)展
        1.1.4 菌影作為遞送系統(tǒng)的研究進(jìn)展
    1.2 乳酸菌的研究進(jìn)展
        1.2.1 乳酸菌的益生作用
        1.2.2 乳酸菌作為基因工程菌的研究進(jìn)展
    1.3 DNA疫苗的研究進(jìn)展
        1.3.1 DNA疫苗的概述
        1.3.2 DNA疫苗的免疫機(jī)制
        1.3.3 DNA疫苗的應(yīng)用
    1.4 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 細(xì)胞
        2.1.2 菌種
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.4 引物
        2.1.5 主要試劑
        2.1.6 主要儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 質(zhì)粒裝載干酪乳桿菌菌影
        2.2.2 轉(zhuǎn)染巨噬細(xì)胞
        2.2.3 巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子的檢測(cè)
        2.2.4 小鼠骨髓來源樹突細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
        2.2.5 樹突細(xì)胞表型檢測(cè)
        2.2.6 樹突細(xì)胞細(xì)胞因子的檢測(cè)
        2.2.7 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)試驗(yàn)
        2.2.8 動(dòng)物試驗(yàn)
3 結(jié)果
    3.1 干酪乳桿菌菌影作為DNA疫苗包裝載體對(duì)轉(zhuǎn)染效率的影響
        3.1.1 熒光顯微鏡檢測(cè)巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)染結(jié)果
        3.1.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的結(jié)果
    3.2 轉(zhuǎn)染巨噬細(xì)胞后免疫分子的檢測(cè)結(jié)果
        3.2.1 qPCR檢測(cè)細(xì)胞因子的結(jié)果
        3.2.2 qPCR檢測(cè)Toll樣受體的結(jié)果
    3.3 干酪乳桿菌菌影對(duì)樹突狀細(xì)胞的影響
        3.3.1 樹突細(xì)胞形態(tài)觀察
        3.3.2 樹突細(xì)胞純度的檢測(cè)結(jié)果
        3.3.3 樹突細(xì)胞表面分子的檢測(cè)結(jié)果
        3.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)樹突細(xì)胞細(xì)胞因子的結(jié)果
        3.3.5 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)結(jié)果
    3.4 動(dòng)物試驗(yàn)
        3.4.1 血清中特異性抗體水平的檢測(cè)結(jié)果
        3.4.2 脾細(xì)胞增殖試驗(yàn)結(jié)果
        3.4.3 CD4~+/CD8~+T細(xì)胞比例結(jié)果
        3.4.4 細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果
4 討論
    4.1 干酪乳桿菌菌影作為包裝載體對(duì)DNA疫苗免疫效果的影響
    4.2 干酪乳桿菌菌影作為DNA疫苗包裝載體的優(yōu)勢(shì)和前景
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]益生素及其在養(yǎng)雞業(yè)中應(yīng)用的研究進(jìn)展[J]. 張健,鄭世民.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2011(02)
[2]DNA疫苗免疫特性及其在動(dòng)物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J]. 張鳳珍,薛江東.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2010(05)

博士論文
[1]胡椒堿通過調(diào)控mTORC1信號(hào)增強(qiáng)巨噬細(xì)胞固有免疫功能的機(jī)制研究[D]. 潘浩.暨南大學(xué) 2017
[2]乳酸菌與茶多酚對(duì)肉雞生理生化性能及免疫機(jī)能的研究[D]. 李華麗.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3644237