豬圓環(huán)病毒（Porcine circovirus，PCV）為圓環(huán)病毒科，圓環(huán)病毒屬成員，分為PCV1和PCV2兩個(gè)血清型。PCV1不引起豬發(fā)��；PCV2被證明是導(dǎo)致斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）的主要病原。PCV2基因組主要包括2個(gè)大的閱讀框架（ORFs），ORF1基因編碼病毒復(fù)制酶（Rep/Rep’），ORF2基因編碼病毒核衣殼蛋白（Cap）。Cap蛋白能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗PCV2的中和性抗體，是分子診斷方法的建立及亞單位疫苗制備的理想靶抗原。自然感染PCV2可同時(shí)產(chǎn)生Cap與Rep/Rep’抗體。因此，對(duì)Rep/Rep’蛋白免疫特性了解及其自然感染與疫苗免疫間鑒別診斷尤為重要。為了闡明PCV2Rep/Rep’蛋白的免疫學(xué)特性，采用桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)了PCV2-Rep和PCV2-Rep’重組蛋白，用純化的重組蛋白免疫BALB/c小鼠，評(píng)價(jià)該蛋白的免疫原性及其免疫保護(hù)性；利用雜交瘤細(xì)胞技術(shù)制備抗PCV2-Rep’蛋白單克隆抗體，以多肽掃描技術(shù)鑒定了該單抗對(duì)應(yīng)的抗原核心表位區(qū)。本研究為PCV2-Rep/Rep’蛋白免疫特性、抗原表位分析及其鑒別診斷技術(shù)的研究奠定了基礎(chǔ)。為... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
CONTENTS
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 PCV2 病原學(xué)
        1.1.1 病毒的分類
        1.1.2 病毒的結(jié)構(gòu)及理化特性
        1.1.3 病毒的基因組結(jié)構(gòu)
        1.1.4 病毒的培養(yǎng)特性
    1.2 PCV 分子生物學(xué)
        1.2.1 病毒的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄
        1.2.2 病毒編碼的主要蛋白
    1.3 引起疾病的臨床癥狀
        1.3.1 斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征的臨床癥狀
        1.3.2 豬皮炎腎病綜合征的臨床癥狀
        1.3.3 豬呼吸道疾病綜合征
        1.3.4 母豬繁殖障礙
    1.4 PCV2 流行病學(xué)
        1.4.1 傳播途徑
        1.4.2 易感動(dòng)物及宿主
    1.5 PCV2 免疫抑制機(jī)理的研究
        1.5.1 PCV2 對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞的影響
        1.5.2 PCV2 對(duì)單核/巨噬細(xì)胞的影響（MLCs）
        1.5.3 PCV2 對(duì)細(xì)胞因子變化的影響
    1.6 病毒診斷技術(shù)的研究進(jìn)展
        1.6.1 病原學(xué)診斷技術(shù)
        1.6.2 血清學(xué)診斷技術(shù)
    1.7 疫苗的研究進(jìn)展
        1.7.1 PCV2 滅活疫苗
        1.7.2 PCV2 弱毒疫苗
        1.7.3 PCV2 亞單位疫苗
    1.8 目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 毒株和細(xì)胞與抗體
        2.1.2 質(zhì)粒和菌株
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 Rep 和 Rep’基因克隆
        2.2.2 重組病毒拯救
        2.2.3 病毒蝕斑克隆
        2.2.4 重組蛋白表達(dá)
        2.2.5 重組蛋白反應(yīng)活性鑒定
        2.2.6 重組蛋白純化
        2.2.7 重組蛋白免疫原性鑒定測(cè)定
        2.2.8 重組蛋白的表達(dá)與純化
        2.2.9 動(dòng)物免疫與細(xì)胞融合
        2.2.10 MAb 亞類鑒定及腹水制備
        2.2.11 MAb 反應(yīng)活性鑒定
        2.2.12 MAb 抗原交叉反應(yīng)鑒定
        2.2.13 合成肽法抗原識(shí)別表位初步定位
        2.2.14 肽掃描法抗原識(shí)別表位精確定位
        2.2.15 重組蛋白亞單位疫苗的制備
        2.2.16 動(dòng)物免疫與攻毒試驗(yàn)
        2.2.17 免疫血清抗體的測(cè)定
        2.2.18 血清中和試驗(yàn)
        2.2.19 常規(guī)與熒光定量 PCR
        2.2.20 組織病理學(xué)檢驗(yàn)
3 結(jié)果
    3.1 基因克隆與測(cè)序
    3.2 重組病毒蝕斑克隆
    3.3 重組病毒繁殖特性
    3.4 Rep 蛋白表達(dá)及反應(yīng)原性鑒定
    3.5 Rep’蛋白表達(dá)及反應(yīng)原性鑒定
    3.6 重組蛋白的純化
    3.7 Rep 和 Rep’蛋白免疫原性測(cè)定
    3.8 PCV2 感染細(xì)胞中 Rep 和 Rep’蛋白檢測(cè)
    3.9 MAb 篩選及亞類鑒定
    3.10 MAb 反應(yīng)原性鑒定
    3.11 MAb 特異性鑒定
    3.12 抗原識(shí)別表位的初步定位
    3.13 抗原識(shí)別表位的精確定位
    3.14 PCV2-rCap、-Rep 和 Rep’蛋白免疫鼠抗體測(cè)定
    3.15 PCV2-rCap、-Rep 和 Rep’免疫鼠中和抗體測(cè)定
    3.16 PCV2-rCap、-Rep 和 Rep’免疫鼠攻毒后病毒血癥測(cè)定
    3.17 PCV2-rCap、-Rep 和 Rep’免疫鼠攻毒后肺臟病毒載量測(cè)定
    3.18 PCV2-rCap、-Rep 和 Rep’免疫鼠攻毒后肺臟組織病理觀察
4 討論
    4.1 PCV2-Rep 和-Rep’蛋白表達(dá)及其免疫原性
    4.2 PCV2-Rep’蛋白單克隆抗體的制備及其抗原表位鑒定
    4.3 PCV2-Rep 和-Rep’和 Cap 蛋白免疫保護(hù)性研究
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬圓環(huán)病毒疫苗的研究進(jìn)展[J]. 劉長(zhǎng)明,陸月華,郭龍軍,危艷武.  獸醫(yī)導(dǎo)刊. 2012(02)
[2]豬圓環(huán)病毒2a/2b亞型病毒株滅活疫苗及其重組Cap蛋白亞單位疫苗的交互免疫實(shí)驗(yàn)[J]. 付玉潔,郭龍軍,黃立平,危艷武,唐青海,吳洪麗,劉長(zhǎng)明.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(02)
[3]豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（LG株）的研制與應(yīng)用[J]. 劉長(zhǎng)明,危艷武,陸月華,黃立平,吳洪麗,張朝霞,溫士剛,姜鳳娟.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2010(09)
[4]抗豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白中和性單克隆抗體的制備及鑒定[J]. 黃立平,劉長(zhǎng)明,危艷武,張朝霞,陸月華,郭龍軍.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2009(02)
[5]豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的研制及應(yīng)用[J]. 張朝霞,劉長(zhǎng)明,危艷武,袁婧,黃立平.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2008(07)
[6]豬圓環(huán)病毒2型免疫過(guò)氧化物酶單層細(xì)胞試驗(yàn)抗體檢測(cè)試劑盒的研制及應(yīng)用[J]. 劉長(zhǎng)明,張超范,危艷武,張朝霞,袁婧.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2007(08)
[7]豬圓環(huán)病毒2型細(xì)胞培養(yǎng)適應(yīng)毒株的培育和鑒定[J]. 劉長(zhǎng)明,張超范,危艷武,譚斌,陸月華,谷守林.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(03)
[8]豬圓環(huán)病毒2型重組Cap蛋白在昆蟲(chóng)桿狀病毒中的表達(dá)[J]. 劉長(zhǎng)明,陸月華,張超范,危艷武,劉煥章,童光志.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2005(06)



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