血根堿是一種天然的異喹啉類生物堿,具有抗菌、促進動物生長及殺蟲等作用。但血根堿也存在一定的毒性,例如可以誘導肝細胞毒性。血根堿在體內(nèi)的消除過程包括氧化代謝和還原代謝途徑。研究發(fā)現(xiàn)1相代謝酶P450酶系中的CYP1A1和CYP1A2能參與血根堿的氧化；血根堿與不表達CYP450酶的細胞孵育,主要生成二氫血根堿,但參與這一過程的還原代謝酶還沒有被發(fā)現(xiàn)。NQO1能夠以NAD（P）H為電子供體,催化進入體內(nèi)的醌類化合物的還原反應,屬于Ⅱ相解毒酶。NQO1是否能夠將血根堿還原為二氫血根堿還沒有報道。因為血根堿還原為二氫血根堿的反應也屬于雙電子還原反應,因此我們推測NQO1可能參與這一反應。應用MTT試驗和Hochest33342/PI染色方法對大鼠BRL細胞和大鼠肝星狀細胞HSC-T6細胞的增殖和凋亡進行研究,結果表明：血根堿和二氫血根堿都能夠濃度和時間依賴性地抑制HSC-T6細胞和BRL細胞的增殖,且血根堿對細胞的增殖抑制程度顯著高于二氫血根堿；血根堿和二氫血根堿都能夠濃度和時間依賴性地誘導細胞凋亡,血根堿誘導細胞的凋亡顯著高于二氫血根堿。說明血根堿對HSC-T6細胞和BRL細胞的毒性高于二氫... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學湖南省

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞對照表
第1章 文獻綜述
    1.1 血根堿研究進展
        1.1.1 血根堿的藥理作用研究進展
        1.1.2 血根堿毒理作用研究進展
        1.1.3 血根堿代謝動力學研究進展
        1.1.4 血根堿分子調(diào)節(jié)機制
    1.2 NQO1研究進展
        1.2.1 NQO1基因的組成與結構
        1.2.2 NQO1單核苷酸多態(tài)性
        1.2.3 NQO1誘導的信號通路研究
        1.2.4 NQO1的保護作用
    1.3 研究的目的和意義
第2章 血根堿對大鼠HSC-T6和BRL細胞增殖和凋亡的影響
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 結果
        2.2.1 SANG和DHSA對HSC-T6細胞活力的影響
        2.2.2 SANG和DHSA對HSC-T6細胞凋亡的影響
        2.2.3 SANG和DHSA對BRL細胞活力的影響
        2.2.4 SANG和DHSA對BRL細胞凋亡的影響
    2.3 討論分析
    2.4 小結
第3章 血根堿引起B(yǎng)RL細胞增殖和凋亡的機制研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 結果
        3.2.1 血根堿對ROS產(chǎn)生、細胞凋亡、細胞周期以及MMP的影響
        3.2.2 血根堿對BCL2和BAX的影響以及BCL2表達下調(diào)的機理研究
        3.2.3 血根堿對caspase的影響以及caspase與細胞凋亡的關系研究
        3.2.4 血根堿誘導的細胞凋亡與ROS及BCL2的關系研究
    3.3 討論分析
    3.4 小結
第4章 NQO1和CYP1A1過表達對BRL細胞的影響
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
    4.2 結果
        4.2.1 血根堿對NQO1和CYP1A1表達的影響
        4.2.2 NQO1和CYP1A1腺相關病毒載體的構建
        4.2.3 腺相關病毒包裝和純化結果
        4.2.4 腺相關病毒最適感染復數(shù)及基因過表達結果
        4.2.5 rAAV-NQO1和rAAV-CYP1A1感染對BRL細胞活力的影響
        4.2.6 rAAV-NQO1和rAAV-CYP1A1感染對BRL細胞凋亡的影響
        4.2.7 rAAV-NQO1和rAAV-CYP1A1感染對凋亡相關基因表達的影響
    4.3 討論
    4.4 小結
第5章 原核表達NQO1對血根堿代謝作用探討
    5.1 材料與方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 方法
    5.2 結果
        5.2.1 pET28a-NQO1原核表達載體的構建
        5.2.2 pET28a-NQO1原核表達與蛋白純化
        5.2.3 血根堿與NQO1的體外孵育試驗
    5.3 討論分析
    5.4 小結
全文總結與創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]NQO1基因C609T、C465T多態(tài)性與子宮內(nèi)膜癌易感性的關系[J]. 李利,高會影,楊威威,李方,程建新.  山東醫(yī)藥. 2013(03)
[2]博落回提取物對早期斷奶仔豬生長性能和血清免疫參數(shù)的影響[J]. 滿意,張春勇,李美荃,駱雪,陳克嶙,郭榮富.  動物營養(yǎng)學報. 2013(01)
[3]MPO、NQO1基因多態(tài)性與急性白血病易感性的相關研究[J]. 賈明峰,席亞明,石秀娥,張豪,鄧偉,李明,李培,徐建旺,馬海珍,姚小健.  中國實驗血液學雜志. 2012(06)
[4]二氫苯駢[c]菲啶類生物堿的制備及其抗乙肝病毒的活性[J]. 吳穎瑞,方宏,牙始康,何瑞杰.  化學研究. 2012(04)
[5]血根堿對卵巢癌細胞生長及放射敏感性的影響[J]. 徐加英,吉俊敏,焦旸,伍理,樊賽軍.  中華放射醫(yī)學與防護雜志. 2012 (01)
[6]NAD（P）H:醌氧化還原酶1對多巴胺能細胞的保護作用[J]. 王艷,王娜,俞國華,袁崇剛.  中國病理生理雜志. 2011(10)
[7]腺病毒滴度不同測定方法比較[J]. 孫鵬宇,張艷玲,荊玉明,張信基,張哲歡,黎誠耀,陳白虹,譚萬龍,李紅衛(wèi).  南方醫(yī)科大學學報. 2011(02)
[8]博落回制劑對禽霍亂、仔豬白痢的對比治療試驗[J]. 郁建生.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2007(02)
[9]博落回生物堿對八種真菌的抑菌作用研究[J]. 郁建平,趙東亮,孟祥斌,周曉秋.  貴州大學學報(自然科學版). 2006(01)
[10]RP-HPLC法同時測定小果博落回中血根堿和白屈菜紅堿的含量[J]. 安彩賢,楊廣德,葉建濤,符軍梅.  中成藥. 2001(11)



本文編號：3641004