發(fā)布時(shí)間：2022-02-22 01:50

　　GTP酶免疫相關(guān)蛋白5（GTPase immune-associated protein 5,Gimap5）參與T細(xì)胞穩(wěn)態(tài)調(diào)控,在免疫和炎癥反應(yīng)等過程中發(fā)揮重要作用,但在鳥類中的功能與特性研究未見報(bào)道。本研究以雞為模式動(dòng)物,克隆不同品系雞Gimap5基因全長(zhǎng)開放閱讀框（ORF）序列及其部分啟動(dòng)子序列,通過生物信息學(xué)分析、組織表達(dá)鑒定和DNA甲基化功能研究,探索雞Gimap5基因的功能特性及其啟動(dòng)子甲基化在轉(zhuǎn)錄調(diào)控過程中的作用。主要研究結(jié)果如下:首先,本研究克隆海蘭褐蛋雞、AA⁺肉雞和三黃肉雞的Gimap5基因全長(zhǎng)開放閱讀框序列,并進(jìn)行序列比對(duì)和生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明:三個(gè)品系雞中Gimap5基因ORF序列均為771 bp,編碼256個(gè)氨基酸,在不同物種間保守性較低。Gimap5蛋白N-末端AIG-1結(jié)構(gòu)域和C-末端跨膜序列α-螺旋結(jié)構(gòu)分別在蛋白功能和細(xì)胞定位中可能發(fā)揮重要作用。其次,qRT-PCR技術(shù)分析Gimap5基因的組織轉(zhuǎn)錄表達(dá)分布及其在炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)中的功能特性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:三個(gè)品系雞中Gimap5在各組織中廣泛表達(dá)。Gimap5基因表達(dá)活性在蛋雞... 

【文章來源】：哈爾濱師范大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 前言
    1.1 Gimap蛋白家族的研究進(jìn)展
        1.1.1 Gimap家族蛋白結(jié)構(gòu)與細(xì)胞定位
        1.1.2 Gimap家族成員與淋巴細(xì)胞
        1.1.3 Gimap家族成員與腫瘤
    1.2 Gimap5基因簡(jiǎn)介
        1.2.1 Gimap5與T細(xì)胞穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)
        1.2.2 Gimap5與BCL-2 家族蛋白
        1.2.3 Gimap5與炎癥
        1.2.4 Gimap5與自身免疫
        1.2.5 Gimap5與造血
        1.2.6 Gimap5與糖尿病
        1.2.7 Gimap5展望
    1.3 啟動(dòng)子對(duì)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
        1.3.1 啟動(dòng)子甲基化對(duì)基因的調(diào)控
        1.3.2 啟動(dòng)子順式作用元件對(duì)基因的調(diào)控
        1.3.3 DNA甲基化分析方法
        1.3.4 Gimap5基因啟動(dòng)子研究
    1.4 本研究目的和意義
第2章 不同品系雞Gimap5基因克隆與序列分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 菌種與質(zhì)粒
        2.1.3 酶和生化試劑
        2.1.4 引物
        2.1.5 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 樣品采集
        2.2.2 T-A克隆
        2.2.3 生物信息學(xué)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 不同品系雞Gimap5基因的克隆
        2.3.2 生物信息學(xué)分析
    2.4 討論
        2.4.1 不同品系雞Gimap5序列對(duì)比分析
        2.4.2 不同品系雞Gimap5基因生物信息學(xué)分析
    2.5 本章小結(jié)
第3章 不同品系雞Gimap5基因的時(shí)空表達(dá)特性分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 酶和生化試劑
        3.1.3 引物
        3.1.4 主要儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 樣品采集
        3.2.2 熒光定量PCR分析
        3.2.3 Gimap5基因的時(shí)空表達(dá)譜分析
        3.2.4 統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 擴(kuò)增曲線和溶解曲線
        3.3.2 相同日齡不同品系雛雞Gimap5基因表達(dá)譜結(jié)果
        3.3.3 不同發(fā)育階段海蘭褐蛋雞Gimap5基因的表達(dá)譜結(jié)果
    3.4 討論
        3.4.1 不同品系14日齡雞Gimap5的組織表達(dá)特性分析
        3.4.2 不同發(fā)育階段海蘭褐蛋雞Gimap5的組織表達(dá)特性分析
    3.5 本章小結(jié)
第4章 Gimap5在免疫和炎癥反應(yīng)中的表達(dá)特性分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 酶和生化試劑
        4.1.3 引物
        4.1.4 主要儀器設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 炎癥模型雛雞的制備和驗(yàn)證
        4.2.2 疫苗免疫模型雛雞的制備和驗(yàn)證
        4.2.3 樣品采集
        4.2.4 炎癥模型中Gimap5的表達(dá)特性分析
        4.2.5 疫苗免疫模型中Gimap5的表達(dá)特性分析
        4.2.6 統(tǒng)計(jì)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 炎癥模型中Gimap5的表達(dá)特性分析
        4.3.2 疫苗免疫模型中Gimap5的表達(dá)特性分析
    4.4 討論
        4.4.1 炎癥模型中Gimap5的表達(dá)特性分析
        4.4.2 疫苗免疫模型中Gimap5的表達(dá)特性分析
    4.5 本章小結(jié)
第5章 不同品系雞Gimap5基因部分啟動(dòng)子的克隆與甲基化水平分析
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.1.2 質(zhì)粒與菌種
        5.1.3 酶與生化試劑
        5.1.4 引物
        5.1.5 主要設(shè)備儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 樣品采集
        5.2.2 T-A克隆
        5.2.3 生物信息學(xué)分析
        5.2.4 Gimap5基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化檢測(cè)
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 不同品系雞Gimap5基因啟動(dòng)子測(cè)序結(jié)果及序列比對(duì)
        5.3.2 生物信息學(xué)分析
        5.3.3 Gimap5基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)分析
    5.4 討論
        5.4.1 不同品系雞Gimap5基因啟動(dòng)子序列比對(duì)
        5.4.2 不同品系雞Gimap5基因啟動(dòng)子序列同源性與進(jìn)化性分析
        5.4.3 Gimap5基因核心啟動(dòng)子預(yù)測(cè)
        5.4.4 Gimap5基因轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)
        5.4.5 Gimap5 基因啟動(dòng)子CpG島預(yù)測(cè)及甲基化分析
    5.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]FOXO3相關(guān)信號(hào)途徑影響細(xì)胞自噬的研究進(jìn)展[J]. 黃堅(jiān)毅,王進(jìn),黃燕寧,陳紅常.  醫(yī)學(xué)綜述. 2019(07)
[2]DNA甲基化的生物信息學(xué)研究進(jìn)展[J]. 凡時(shí)財(cái),張學(xué)工.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2009(02)
[3]DNA甲基化方法研究現(xiàn)狀[J]. 沈佳堯,侯鵬,祭美菊,李松,陸祖宏,何農(nóng)躍.  生命的化學(xué). 2003(02)

碩士論文
[1]雞不同疫苗免疫反應(yīng)中幾個(gè)免疫相關(guān)基因的表達(dá)特性研究[D]. 趙冬雪.哈爾濱師范大學(xué) 2017
[2]LPS誘導(dǎo)雞幾個(gè)炎癥反應(yīng)相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控研究[D]. 穆衛(wèi)濤.哈爾濱師范大學(xué) 2016
[3]血細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子SPIB在肺癌轉(zhuǎn)移中的功能研究[D]. 牛卿.天津醫(yī)科大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3638448