A型塞內卡病毒（Senecavirus A,SVA）是小RNA病毒科,塞內卡病毒屬成員。SVA臨床癥狀主要以腹瀉、鼻及蹄部囊泡、糜爛等癥狀為特征,與口蹄疫病毒（FMDV）、水皰性口炎病毒（VSV）、豬傳染性水皰病毒（SVDV）及豬水皰性皮疹病毒（VESV）引起的癥狀難以區(qū)分。各年齡段的豬均可以感染該病毒,對養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的困擾。本試驗從發(fā)生水皰性疾病的豬的水皰液中分離鑒定了SVA毒株,并對ICR小鼠進行感染試驗。2017年,南方某豬場發(fā)生不明病原引起的水皰性疾病,該場豬均接種過FMDV疫苗。通過RT-PCR方法檢測,確定引起該場水皰性疾病的病原為SVA。通過BHK21細胞分離2株病毒,并通過RT-PCR、間接免疫熒光試驗、電鏡觀察進行鑒定,將分離鑒定的2株病毒分別命名為CH/FuJ/2017與CH/FuJ1/2017,并對其進行測序和分析;結果表明,CH/FuJ/2017與CH/FuJ1/2017之間核苷酸序列同源性為99.7%,與國內參考株核苷酸序列同源性在96.1%⁹8.0%,與SVV-001株核苷酸序列同源性為93.9%,與國外參考株之間核苷酸序列同源性為9... 

【文章來源】：黑龍江八一農墾大學黑龍江省

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻綜述
    1.1 A型塞內卡病毒的基因組結構及編碼蛋白質
        1.1.1 A型塞內卡病毒的基因組結構
        1.1.2 L蛋白
        1.1.3 P1 蛋白
        1.1.4 P2 蛋白
        1.1.5 P3 蛋白
    1.2 A型塞內卡病毒的發(fā)病機制
    1.3 A型塞內卡病毒的流行病學
    1.4 A型塞內卡病毒的診斷
    1.5 A型塞內卡病毒的預防和控制
    1.6 小RNA病毒小鼠感染模型研究進展
    1.7 目的意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 樣品來源
        2.1.2 細胞
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 試驗動物
        2.1.5 主要試驗儀器設備
    2.2 病毒的分離鑒定
        2.2.1 樣品處理
        2.2.2 引物
        2.2.3 RNA的提取及反轉錄
        2.2.4 樣品的RT-PCR檢測
        2.2.5 細胞培養(yǎng)及傳代
        2.2.6 病毒的分離及鑒定
        2.2.7 TCID50 的測定
        2.2.8 一步生長曲線的測定
        2.2.9 SVA全基因組序列測定及分析
        2.2.10 動物回歸試驗
    2.3 TaqMan熒光定量PCR方法建立
        2.3.1 引物設計
        2.3.2 標準品的制備
        2.3.3 TaqMan熒光定量PCR方法反應條件優(yōu)化
        2.3.4 標準曲線繪制
        2.3.5 特異性試驗
        2.3.6 敏感性試驗
        2.3.7 重復性試驗
    2.4 SVA感染ICR小鼠試驗
        2.4.1 感染途徑的確定
        2.4.2 SVA感染不同日齡ICR小鼠的測定
        2.4.3 病毒組織臟器分布及病毒載量測定
        2.4.4 SVA/ICR-F10 的分離鑒定
        2.4.5 SVA/ICR-F10 TCID50 及一步生長曲線的測定
        2.4.6 SVA/ICR-F10 感染ICR乳鼠試驗
        2.4.7 中和抗體效價的測定
        2.4.8 SVA感染對脾淋巴細胞的影響
    2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
3 結果與分析
    3.1 病毒的分離鑒定
        3.1.1 樣品的RT-PCR檢測
        3.1.2 病毒的分離鑒定
        3.1.3 TCID50 的測定
        3.1.4 一步生長曲線的測定
        3.1.5 SVA全基因組序列測定及分析
        3.1.6 動物回歸試驗
    3.2 TaqMan熒光定量PCR方法建立
        3.2.1 標準品的制備
        3.2.2 TaqMan熒光定量PCR方法反應條件優(yōu)化
        3.2.3 TaqMan熒光定量PCR方法標準曲線
        3.2.4 特異性試驗
        3.2.5 敏感性試驗
        3.2.6 重復性試驗
    3.3 SVA感染ICR小鼠試驗
        3.3.1 感染途徑的測定
        3.3.2 SVA感染不同日齡ICR小鼠的測定
        3.3.3 組織分布及病毒載量
        3.3.4 SVA/ICR-F10 的分離鑒定
        3.3.5 SVA/ICR-F10 TCID_(50)及一步生長曲線
        3.3.6 SVA/ICR-F10 感染ICR乳鼠試驗
        3.3.7 中和抗體效價測定
        3.3.8 SVA感染對脾淋巴細胞的影響
4 討論
5 結論
參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3637546