為了建立穩(wěn)定表達(dá)犬瘟熱病毒基質(zhì)蛋白（M）的細(xì)胞系,從犬瘟熱病毒狐貍源分離毒株SD16F中擴(kuò)增出M基因,將其克隆至真核表達(dá)質(zhì)粒pCI-neo的Xho I/Not I位點(diǎn)處。重組質(zhì)粒經(jīng)PCR、Xho I/Not I雙酶切及測序鑒定后轉(zhuǎn)染Vero-SLAM細(xì)胞,利用G418抗性壓力篩選陽性細(xì)胞,并采用RT-PCR及間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）鑒定轉(zhuǎn)染細(xì)胞中M蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果表明,成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pCI-neo-M,瞬時(shí)及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Vero-SLAM細(xì)胞后,RT-PCR和IFA能夠檢測到M基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá),且G418篩選后細(xì)胞與其親本Vero-SLAM細(xì)胞生長特性基本一致,表明獲得1株能穩(wěn)定表達(dá)M蛋白的細(xì)胞系,命名為Vero-SLAM-M。 

【文章來源】：中國獸醫(yī)雜志. 2020,56(05)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 質(zhì)粒、細(xì)胞、犬瘟熱病毒及陽性血清
        1.1.2 主要試劑和儀器
    1.2 方法
        1.2.1 重組質(zhì)粒 pCI-neo-M 的構(gòu)建
            1.2.1.1 PCR 擴(kuò)增
            1.2.1.2 載體的構(gòu)建與鑒定
        1.2.2 細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及M基因表達(dá)鑒定
            1.2.2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            1.2.2.2 RT-PCR 鑒定
            1.2.2.3 間接免疫熒光鑒定
        1.2.3 Vero-SLAM-M 細(xì)胞系的構(gòu)建
            1.2.3.1 細(xì)胞G418 篩選濃度的確定
            1.2.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及克隆篩選
            1.2.3.3 M 基因轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平的檢測
            1.2.3.4 細(xì)胞生長曲線測定
2 結(jié)果
    2.1 pCI-neo-M 表達(dá)載體構(gòu)建
    2.2 M基因的瞬時(shí)表達(dá)
    2.3 G418 最適濃度測定結(jié)果
    2.4 Vero-SLAM-M 細(xì)胞系的構(gòu)建
    2.5 Vero-SLAM-M 細(xì)胞系生長曲線
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]表達(dá)狂犬病病毒G蛋白重組犬瘟熱弱毒疫苗株的研究[D]. 王喜軍.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012



本文編號：3636535