硒蛋白S（SelS）是一種潴留于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細胞膜的硒蛋白,廣泛分布于在生物機體內(nèi),如肝臟、腎臟、骨骼肌、脂肪、下丘腦等組織。相關(guān)研究顯示,硒蛋白S可以保護細胞免于氧化損傷,具有調(diào)節(jié)細胞氧化還原平衡和抗氧化作用,參與炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng),并拮抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其誘導(dǎo)的細胞凋亡。赭曲霉毒素是一種由曲霉屬真菌和青霉菌屬真菌產(chǎn)出的毒素,其中我們生活關(guān)系最密切相關(guān)的是赭曲霉毒素A（OTA）。OTA廣泛分布于農(nóng)作物和農(nóng)產(chǎn)品,并能在動物和人體中富集,造成健康危機。本研究主要通過引物設(shè)計,將酶切位點引入目的基因,構(gòu)建真核載體pcDNA3.1-SelS;通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將重組子pcDNA3.1-SelS轉(zhuǎn)染至豬腎細胞（PK15）,篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株,細胞分組情況:PK15+pcDNA3.1-SelS轉(zhuǎn)染組、PK15+pcDNA3.1轉(zhuǎn)染組、未轉(zhuǎn)染的正常PK15細胞組;采用OTA損害細胞造模,觀察不同細胞組對OTA毒性損傷的影響,初步探討過表達硒蛋白S的細胞生物學(xué)功能。試驗一:重組質(zhì)粒pcDNA3.1-SelS的構(gòu)建與鑒定本試驗通過在Genbank搜索豬硒蛋白S的mRNA,設(shè)計引物,并通過PCR、連接T載體... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號與縮略語
前言
第一篇 文獻綜述
    第一章 硒和硒蛋白S的研究進展
        1 硒和硒蛋白的概述
            1.1 硒元素
            1.2 硒蛋白
            1.3 硒代半胱氨酸插入元件
            1.4 硒蛋白表達的低效性
        2 硒蛋白S的概述
            2.1 硒蛋白S的簡介
            2.2 硒蛋白S的生物學(xué)功能
        參考文獻
    第二章 赭曲霉毒素A的研究進展
        1 赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的概述
            1.1 OTA的理化性質(zhì)
            1.2 OTA的合成
            1.3 OTA在動物體內(nèi)的代謝
        2 OTA的毒性作用
            2.1 OTA的腎毒性和肝毒性
            2.2 OTA的免疫毒害作用
            2.3 OTA的其它破壞作用
        參考文獻
第二篇 試驗研究
    第三章 重組質(zhì)粒pcDNA3.1-SelS的構(gòu)建與鑒定
        1 材料與方法
            1.1 主要試劑與儀器
            1.2 豬腎總RNA的提取和cDNA的合成
            1.3 引物設(shè)計合成和目的基因SelS合成
            1.4 連接T載體和陽性克隆篩選與鑒定
            1.5 重組基因pcDNA3.1-SelS的構(gòu)建和鑒定
        2 結(jié)果
            2.1 豬SelS的SECIS序列
            2.2 豬腎組織中擴增SelS基因條帶
            2.3 pcDNA3.1-SelS重組子的鑒定
            2.4 pcDNA3.1-SelS測序結(jié)果
        3 討論
        參考文獻
    第四章 重組子pcDNA3.1-SelS的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及表達水平檢測
        1 材料與方法
            1.1 主要試劑與儀器
            1.2 豬腎細胞培養(yǎng)與傳代
            1.3 pcDNA3.1-SelS和pcDNA3.1質(zhì)粒DNA的大量抽提
            1.4 重組子pcDNA3.1-SelS細胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染
            1.5 熒光定量PCR (RT-PCR)法檢測轉(zhuǎn)染后SelS基因的轉(zhuǎn)錄水平
            1.6 Western Blotting檢測轉(zhuǎn)染后SelS蛋白的表達
            1.7 MTT法測細胞增殖性
            1.8 細胞內(nèi)MDA、SOD和GSH的測定
        2 結(jié)果
            2.1 RT-PCR法檢測SelS mRNA表達水平
            2.2 Western Blotting檢測轉(zhuǎn)染后SelS蛋白的表達
            2.3 細胞增殖性的測定結(jié)果
            2.4 細胞內(nèi)MDA、SOD和GSH的檢測結(jié)果
        3 討論
        參考文獻
    第五章 過表達SelS保護PK15細胞拮抗OTA的細胞損傷
        1 材料與方法
            1.1 主要試劑與儀器
            1.2 細胞培養(yǎng)與傳代
            1.3 MTT檢測細胞毒力
            1.4 細胞內(nèi)MDA、SOD和GSH的測定
        2 結(jié)果
            2.1 MTT檢測細胞毒力結(jié)果
            2.2 細胞內(nèi)MDA、SOD和GSH測定結(jié)果
        3 討論
        參考文獻
全文結(jié)論
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3632949