體細(xì)胞克隆效率主要取決于供體細(xì)胞核是否被完全重編程,而供體細(xì)胞重編程涉及去除表觀遺傳標(biāo)記,將其逆轉(zhuǎn)為未分化的狀態(tài),獲得可重新分化成各種類型細(xì)胞的能力[1]。組蛋白3第9位賴氨酸三甲基化（H3K9me3）依賴的異染色質(zhì)是體細(xì)胞發(fā)生完全重編程的重大障礙[2]�；ò咭种埔蜃油次铮╯uppressor of variegation3-9 homologl/2, SUV39H1/2）基因編碼特異性催化H3K9me3形成的組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶,促進(jìn)染色質(zhì)濃縮形成異染色質(zhì),調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄。為了探究SUV39H1/H2基因在體細(xì)胞重編程過程中的作用,本研究采用RNA干擾（RNAi）技術(shù)抑制德保豬耳成纖維細(xì)胞SUV39H1/H2基因表達(dá),并以之為核供體,探究對豬體細(xì)胞核移植早期胚胎發(fā)育潛能的影響。以探索提高克隆胚胎發(fā)育潛能及克隆動物生產(chǎn)效率新途徑。一、 SUV39H1/H2基因表達(dá)載體構(gòu)建及其shRNA干擾效率驗(yàn)證1.為了獲得具有顯著抑制SUV39H1/H2基因表達(dá)的shRNA片段,本試驗(yàn)首先克隆獲得德保豬SUV39H1基因第二外顯子和SUV39H2基因完整的ORF序列,分別構(gòu)建其真核表達(dá)載體并在293T... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū)211工程院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 體細(xì)胞表觀重編程的研究進(jìn)展
        1 DNA甲基化與體細(xì)胞重編程
        2 組蛋白乙�；c體細(xì)胞重編程
        3 組蛋白甲基化與體細(xì)胞重編程
            3.1 組蛋白甲基化概述
            3.2 H3K4me3調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄及胚胎發(fā)育
            3.3 H3K27me3調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄及胚胎發(fā)育
        4 H3K9甲基化與體細(xì)胞重編程
            4.1 H3K9甲基化轉(zhuǎn)移酶與去甲基化酶
            4.2 H3K9甲基化與胚胎發(fā)育
            4.3 H3K9me3與體細(xì)胞重編程
研究目的與意義
第二部分 實(shí)驗(yàn)研究
    第二章 豬SUV39H1/H2基因表達(dá)載體構(gòu)建及其SHRNA干擾效率驗(yàn)證
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 德保豬SUV39H1/H2基因克隆及序列分析
            2.2 德保豬SUV39H1/H2基因真核表達(dá)載體構(gòu)建
            2.3 德保豬SUV39H1/H2基因真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞
            2.4 SUV39H1 shRNA抑制效率驗(yàn)證
            2.5 SUV39H2 shRNA抑制效率驗(yàn)證
        3 分析與討論
        4 小結(jié)
    第三章 SUV39H1/H2基因表達(dá)抑制對豬成纖維細(xì)胞生長與增殖的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 SUV39H1/H2基因shRNA慢病毒包裝及滴度測定
            2.2 SUV39H1/H2基因表達(dá)抑制對德保豬耳緣成纖維細(xì)胞生長的影響
            2.3 SUV39H1/H2基因表達(dá)抑制對德保豬耳成纖維細(xì)胞H3K9me3水平的影響
            2.4 SUV39H1/H2基因表達(dá)抑制對細(xì)胞表觀修飾及細(xì)胞周期蛋白相關(guān)基因表達(dá)的影響
        3 分析與討論
        4 小結(jié)
    第四章 SUV39H1/H2基因表達(dá)抑制對豬體細(xì)胞核移植胚胎發(fā)育的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 H3K9me3在豬植入前胚胎中的表達(dá)
            2.2 SUV39H1/H2、SETDB1、KDM4D基因在豬早期胚胎中的表達(dá)
            2.3 SUV39H1/H2基因表達(dá)抑制對豬核移植胚胎發(fā)育的影響
        3 分析討論
        4 小結(jié)
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]The Epigenetic Reprogramming Roadmap in Generation of iPSCs from Somatic Cells[J]. Jacob Brix,Yan Zhou,Yonglun Luo.  Journal of Genetics and Genomics. 2015(12)
[2]細(xì)胞周期調(diào)控的研究進(jìn)展[J]. 高燕,林莉萍,丁健.  生命科學(xué). 2005(04)

博士論文
[1]豬卵胞質(zhì)注射及單精子胞質(zhì)內(nèi)注射介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因方法研究[D]. 劉帥.廣西大學(xué) 2015

碩士論文
[1]水牛SUV39H1基因shRNA片段的篩選及對外源轉(zhuǎn)基因表達(dá)效率的影響[D]. 林浪.廣西大學(xué) 2013
[2]YY1基因?qū)λＶ踩肭芭咛NA甲基化影響的初步研究[D]. 龔云.廣西大學(xué) 2013
[3]水牛CD14基因shRNA片段的篩選及其對相關(guān)基因表達(dá)的影響研究[D]. 李美青.廣西大學(xué) 2012



本文編號：3630022