奶牛子宮內(nèi)膜炎是常發(fā)的子宮組織炎癥損傷,常由分娩損傷和細(xì)菌感染引起,可造成動(dòng)物著床失敗、流產(chǎn)乃至不孕,給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。由于該病的致病機(jī)理尚不明確,迄今為止還沒(méi)有良好的子宮內(nèi)膜炎治療方法。目前,臨床上主要通過(guò)抗微生物藥物治療子宮內(nèi)膜炎,但是治療過(guò)程中產(chǎn)生的抗生素殘留及耐藥菌又會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的食品安全問(wèn)題,因而其在許多國(guó)家已被禁用或嚴(yán)格限制使用。該病的發(fā)生不僅與致病因素有關(guān),還與機(jī)體的自身免疫狀態(tài)密切相關(guān)。最新研究顯示,miRNAs可調(diào)控多種疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸,其作用機(jī)理主要是通過(guò)與靶基因的3’-UTR結(jié)合而沉默基因的表達(dá)。miR-19a屬于多順?lè)醋觤iR-17-92簇,在結(jié)腸炎、肺炎、動(dòng)脈粥樣硬化以及多種癌癥發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。細(xì)菌內(nèi)毒素如脂多糖（LPS）與細(xì)胞表面的模式識(shí)別受體4（TLR4）結(jié)合后可激活NF-κB通路,引起機(jī)體的炎性應(yīng)答反應(yīng),促進(jìn)細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6等的表達(dá)。本研究通過(guò)構(gòu)建牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞（bEECs）和小鼠子宮內(nèi)膜炎癥模型,探索miRNAs對(duì)子宮內(nèi)膜炎癥應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用,闡明子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生機(jī)制,為臨床上治療奶牛子宮內(nèi)膜炎提供新... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省211工程院校教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表
1 前言
    1.1 子宮內(nèi)膜炎
        1.1.1 子宮內(nèi)膜炎的病因與危害
        1.1.2 子宮內(nèi)膜炎的癥狀
        1.1.3 子宮內(nèi)膜炎的診斷
        1.1.4 子宮內(nèi)膜炎的治療與預(yù)防
    1.2 miR-19a的研究進(jìn)展
        1.2.1 MicroRNAs
        1.2.2 miR-19a
    1.3 TBK1 的研究進(jìn)展
    1.4 NF-κB信號(hào)通路與炎癥
    1.5 研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 主要試劑及耗材
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)相關(guān)溶液的配制
        2.1.5 生物信息學(xué)分析相關(guān)軟件及數(shù)據(jù)庫(kù)
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小鼠子宮內(nèi)膜炎模型的建立
        2.2.2 小鼠子宮組織病理學(xué)評(píng)估
        2.2.3 牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.4 miR-19a靶基因的預(yù)測(cè)與分析
        2.2.5 TBK13'-UTR和 Mut-TBK13'-UTR雙熒光素酶報(bào)告基因載體的構(gòu)建
        2.2.6 雙熒光素酶報(bào)告基因的檢測(cè)
        2.2.7 細(xì)胞炎癥模型的建立
        2.2.8 miR-19a mimics和 inhibitor的轉(zhuǎn)染
        2.2.9 siRNA的轉(zhuǎn)染
        2.2.10 qPCR對(duì) miRNA及相關(guān)基因表達(dá)的分析
        2.2.11 Western blot對(duì)蛋白表達(dá)情況的檢測(cè)
        2.2.12 ELISA對(duì)炎性因子表達(dá)量的檢測(cè)
        2.2.13 免疫熒光技術(shù)
        2.2.14 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理
3 結(jié)果與分析
    3.1 小鼠子宮內(nèi)膜炎模型的鑒定
        3.1.1 組織病理學(xué)觀察
        3.1.2 LPS對(duì) TLR4 表達(dá)的影響
        3.1.3 LPS對(duì)組織中炎性因子表達(dá)水平的影響
    3.2 miR-19a在小鼠子宮中的表達(dá)分析
    3.3 miR-19a在 bEECs中的表達(dá)分析
        3.3.1 LPS對(duì) bEECs活力的影響
        3.3.2 miR-19a在 LPS刺激的bEECs中的表達(dá)改變
    3.4 miR-19a在 LPS誘導(dǎo)的bEECs炎癥中的作用
        3.4.1 miR-19a mimics轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)
        3.4.2 miR-19a對(duì)炎性因子表達(dá)的影響
        3.4.3 miR-19a對(duì) TLR4/NF-κB信號(hào)通路的影響
    3.5 miR-19a靶基因的預(yù)測(cè)與驗(yàn)證
        3.5.1 靶基因的預(yù)測(cè)與分析
        3.5.2 miR-19a與 TBK1 表達(dá)量的相關(guān)性分析
        3.5.3 TBK13'-UTR和 Mut-TBK13'-UTR載體的成功構(gòu)建
        3.5.4 雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)對(duì)靶基因的驗(yàn)證
    3.6 siRNA干擾TBK1 在細(xì)胞中的功能研究
        3.6.1 最佳siRNA的篩選
        3.6.2 siRNA對(duì) TBK1 的沉默效果
        3.6.3 siRNA沉默TBK1 對(duì)炎性因子表達(dá)的影響
        3.6.4 siRNA沉默TBK1對(duì)NF-κB信號(hào)通路的作用
4 討論
    4.1 miR-19a與炎癥
    4.2 研究展望
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[9]奶牛子宮內(nèi)膜炎研究進(jìn)展[J]. 許臘梅,馮萬(wàn)宇,王巖,王志明,段瑩瑩,侯振中.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2008(08)
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碩士論文
[1]IFN-tau通過(guò)NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)金葡菌誘導(dǎo)的小鼠子宮內(nèi)膜炎癥的應(yīng)答[D]. 陳秀英.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)奶牛難產(chǎn)的病因分析與處置[D]. 周旭東.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3629977