奶牛子宮內膜炎是常發(fā)的子宮組織炎癥損傷,常由分娩損傷和細菌感染引起,可造成動物著床失敗、流產乃至不孕,給養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。由于該病的致病機理尚不明確,迄今為止還沒有良好的子宮內膜炎治療方法。目前,臨床上主要通過抗微生物藥物治療子宮內膜炎,但是治療過程中產生的抗生素殘留及耐藥菌又會導致嚴重的食品安全問題,因而其在許多國家已被禁用或嚴格限制使用。該病的發(fā)生不僅與致病因素有關,還與機體的自身免疫狀態(tài)密切相關。最新研究顯示,miRNAs可調控多種疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉歸,其作用機理主要是通過與靶基因的3’-UTR結合而沉默基因的表達。miR-19a屬于多順反子miR-17-92簇,在結腸炎、肺炎、動脈粥樣硬化以及多種癌癥發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用。細菌內毒素如脂多糖（LPS）與細胞表面的模式識別受體4（TLR4）結合后可激活NF-κB通路,引起機體的炎性應答反應,促進細胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6等的表達。本研究通過構建牛子宮內膜上皮細胞（bEECs）和小鼠子宮內膜炎癥模型,探索miRNAs對子宮內膜炎癥應答的調節(jié)作用,闡明子宮內膜炎的發(fā)生機制,為臨床上治療奶牛子宮內膜炎提供新... 

【文章來源】：華中農業(yè)大學湖北省211工程院校教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 前言
    1.1 子宮內膜炎
        1.1.1 子宮內膜炎的病因與危害
        1.1.2 子宮內膜炎的癥狀
        1.1.3 子宮內膜炎的診斷
        1.1.4 子宮內膜炎的治療與預防
    1.2 miR-19a的研究進展
        1.2.1 MicroRNAs
        1.2.2 miR-19a
    1.3 TBK1 的研究進展
    1.4 NF-κB信號通路與炎癥
    1.5 研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 主要試劑及耗材
        2.1.4 實驗相關溶液的配制
        2.1.5 生物信息學分析相關軟件及數(shù)據(jù)庫
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠子宮內膜炎模型的建立
        2.2.2 小鼠子宮組織病理學評估
        2.2.3 牛子宮內膜上皮細胞的培養(yǎng)
        2.2.4 miR-19a靶基因的預測與分析
        2.2.5 TBK13'-UTR和 Mut-TBK13'-UTR雙熒光素酶報告基因載體的構建
        2.2.6 雙熒光素酶報告基因的檢測
        2.2.7 細胞炎癥模型的建立
        2.2.8 miR-19a mimics和 inhibitor的轉染
        2.2.9 siRNA的轉染
        2.2.10 qPCR對 miRNA及相關基因表達的分析
        2.2.11 Western blot對蛋白表達情況的檢測
        2.2.12 ELISA對炎性因子表達量的檢測
        2.2.13 免疫熒光技術
        2.2.14 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理
3 結果與分析
    3.1 小鼠子宮內膜炎模型的鑒定
        3.1.1 組織病理學觀察
        3.1.2 LPS對 TLR4 表達的影響
        3.1.3 LPS對組織中炎性因子表達水平的影響
    3.2 miR-19a在小鼠子宮中的表達分析
    3.3 miR-19a在 bEECs中的表達分析
        3.3.1 LPS對 bEECs活力的影響
        3.3.2 miR-19a在 LPS刺激的bEECs中的表達改變
    3.4 miR-19a在 LPS誘導的bEECs炎癥中的作用
        3.4.1 miR-19a mimics轉染效率的檢測
        3.4.2 miR-19a對炎性因子表達的影響
        3.4.3 miR-19a對 TLR4/NF-κB信號通路的影響
    3.5 miR-19a靶基因的預測與驗證
        3.5.1 靶基因的預測與分析
        3.5.2 miR-19a與 TBK1 表達量的相關性分析
        3.5.3 TBK13'-UTR和 Mut-TBK13'-UTR載體的成功構建
        3.5.4 雙熒光素酶實驗對靶基因的驗證
    3.6 siRNA干擾TBK1 在細胞中的功能研究
        3.6.1 最佳siRNA的篩選
        3.6.2 siRNA對 TBK1 的沉默效果
        3.6.3 siRNA沉默TBK1 對炎性因子表達的影響
        3.6.4 siRNA沉默TBK1對NF-κB信號通路的作用
4 討論
    4.1 miR-19a與炎癥
    4.2 研究展望
5 結論
參考文獻
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]奶牛子宮內膜炎的病因與綜合防制[J]. 梁書文.  中國畜牧獸醫(yī). 2011(03)
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碩士論文
[1]IFN-tau通過NF-κB信號轉導通路調節(jié)金葡菌誘導的小鼠子宮內膜炎癥的應答[D]. 陳秀英.華中農業(yè)大學 2017
[2]規(guī)�；膛ｐB(yǎng)殖場奶牛難產的病因分析與處置[D]. 周旭東.西北農林科技大學 2014



本文編號：3629977