卵母細(xì)胞的玻璃化冷凍是保護(hù)物種資源有效手段,同時(shí)也可以為克隆等現(xiàn)代生物技術(shù)的研究提供大量的實(shí)驗(yàn)材料。由于豬卵母細(xì)胞對(duì)低溫極其敏感,其玻璃化冷凍的研究進(jìn)展十分緩慢。本實(shí)驗(yàn)以豬MⅡ期卵母細(xì)胞為研究對(duì)象,研究了幾種玻璃化冷凍液對(duì)卵母細(xì)胞的毒性作用及不同冷凍載體、冷凍液對(duì)冷凍效果的影響,并通過體外受精對(duì)玻璃化冷凍后卵母細(xì)胞的發(fā)育能力進(jìn)行檢驗(yàn),以探討豬卵母細(xì)胞在玻璃化冷凍過程中的受損機(jī)制及體外受精的影響因素,篩選出較合適的冷凍液組合及載體,為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。本研究主要包括以下主要內(nèi)容：1.分別采用三種不同的冷凍液組合按照對(duì)應(yīng)冷凍程序處理豬MⅡ期卵母細(xì)胞后不經(jīng)冷凍進(jìn)行孤雌激活培養(yǎng),研究不同冷凍液組合對(duì)卵母細(xì)胞的毒性影響。2.分別采用三種不同的的冷凍液組合按照對(duì)應(yīng)冷凍程序?qū)ωiMⅡ期卵母細(xì)胞采用GMP法進(jìn)行冷凍,研究不同冷凍液組合對(duì)卵母細(xì)胞存活率的影響。3.選擇效果最好的冷凍液組合,分別采用GMP和Cryotop為載體對(duì)豬MⅡ卵母細(xì)胞進(jìn)行冷凍,研究不同載體對(duì)卵母細(xì)胞存活率的影響。4.通過FITC-PNA染色研究玻璃化冷凍對(duì)卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒分布的影響。5.分別對(duì)豬MⅡ期卵母細(xì)胞外卵丘進(jìn)行不同處理后進(jìn)... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省211工程院校

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 卵母細(xì)胞在冷凍過程中的損傷機(jī)制
    1.2 冷凍保存的方法
        1.2.1 慢速冷凍法(Slow freezing)
        1.2.2 快速冷凍法(Rapid freezing)
        1.2.3 超快速冷凍法(Ultra rapid freezing)
        1.2.4 玻璃化冷凍(Vitrification)
    1.3 玻璃化冷凍的原理
        1.3.1 玻璃化冷凍的定義
        1.3.2 冷凍保護(hù)劑的作用
        1.3.3 玻璃化冷凍保護(hù)劑的選擇
        1.3.4 玻璃化冷凍載體的選擇
    1.4 冷凍對(duì)卵母細(xì)胞結(jié)構(gòu)的損傷
        1.4.1 冷凍對(duì)透明帶的損傷
        1.4.2 冷凍對(duì)細(xì)胞膜的損傷
        1.4.3 冷凍對(duì)細(xì)胞骨架的損傷
    1.5 豬卵母細(xì)胞體外受精的研究
        1.5.1 體外受精技術(shù)的研究進(jìn)展
        1.5.2 卵丘細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞的作用
        1.5.3 卵丘細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞受精及后期發(fā)育能力的影響
        1.5.4 精子的體外獲能
        1.5.5 影響體外受精效果的因素
    1.6 本研究的目的與意義
2 材料方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要儀器設(shè)備與耗材
        2.1.3 主要試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 豬卵母細(xì)胞體外成熟
        2.2.2 豬卵母細(xì)胞成熟的外部鑒定
        2.2.3 豬卵母細(xì)胞的孤雌激活與培養(yǎng)
        2.2.4 豬卵母細(xì)胞胞質(zhì)成熟鑒定
        2.2.5 豬卵母細(xì)胞的冷凍與解凍
        2.2.6 豬卵母細(xì)胞的存活率檢驗(yàn)
        2.2.7 豬卵母細(xì)胞的體外受精
        2.2.8 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.3.1 不同冷凍液對(duì)卵母細(xì)胞的毒性影響
        2.3.2 不同載體對(duì)卵母細(xì)胞的冷凍效果的影響
        2.3.3 冷凍前后卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒分布的變化
        2.3.4 卵丘細(xì)胞對(duì)體外受精效果的影響
        2.3.5 冷凍對(duì)卵母細(xì)胞后期發(fā)育能力的影響
3 結(jié)果與分析
    3.1 不同冷凍液組的毒性對(duì)卵母細(xì)胞的影響
    3.2 不同冷凍液對(duì)卵母細(xì)胞冷凍后存活率的影響
    3.3 不同載體冷凍后對(duì)細(xì)胞存活率的影響
    3.4 冷凍對(duì)卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒分布的影響
    3.5 卵丘細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞的體外受精的影響
    3.6 冷凍對(duì)卵母細(xì)胞后期發(fā)育能力的影響
4 討論
    4.1 不同冷凍液對(duì)卵母細(xì)胞的冷凍效果及毒性影響
    4.2 不同載體對(duì)卵母細(xì)胞冷凍效果的影響
    4.3 冷凍對(duì)卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒分布的影響
    4.4 卵丘細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞的體外受精的影響
    4.5 冷凍對(duì)卵母細(xì)胞后期發(fā)育能力的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]豬MⅡ期卵母細(xì)胞玻璃化冷凍的研究[D]. 陸文昊.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[2]卵丘細(xì)胞對(duì)豬卵母細(xì)胞成熟及其發(fā)育能力的影響[D]. 郝元斌.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[3]牛卵母細(xì)胞玻璃化冷凍保存的研究[D]. 王義鵬.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[4]豬MII期卵母細(xì)胞玻璃化冷凍的研究[D]. 陶志云.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[5]豬卵母細(xì)胞玻璃化冷凍及體外成熟的研究[D]. 黃晶.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3629402