卵母細胞的玻璃化冷凍是保護物種資源有效手段,同時也可以為克隆等現(xiàn)代生物技術(shù)的研究提供大量的實驗材料。由于豬卵母細胞對低溫極其敏感,其玻璃化冷凍的研究進展十分緩慢。本實驗以豬MⅡ期卵母細胞為研究對象,研究了幾種玻璃化冷凍液對卵母細胞的毒性作用及不同冷凍載體、冷凍液對冷凍效果的影響,并通過體外受精對玻璃化冷凍后卵母細胞的發(fā)育能力進行檢驗,以探討豬卵母細胞在玻璃化冷凍過程中的受損機制及體外受精的影響因素,篩選出較合適的冷凍液組合及載體,為進一步研究奠定基礎(chǔ)。本研究主要包括以下主要內(nèi)容：1.分別采用三種不同的冷凍液組合按照對應(yīng)冷凍程序處理豬MⅡ期卵母細胞后不經(jīng)冷凍進行孤雌激活培養(yǎng),研究不同冷凍液組合對卵母細胞的毒性影響。2.分別采用三種不同的的冷凍液組合按照對應(yīng)冷凍程序?qū)ωiMⅡ期卵母細胞采用GMP法進行冷凍,研究不同冷凍液組合對卵母細胞存活率的影響。3.選擇效果最好的冷凍液組合,分別采用GMP和Cryotop為載體對豬MⅡ卵母細胞進行冷凍,研究不同載體對卵母細胞存活率的影響。4.通過FITC-PNA染色研究玻璃化冷凍對卵母細胞皮質(zhì)顆粒分布的影響。5.分別對豬MⅡ期卵母細胞外卵丘進行不同處理后進... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省211工程院校

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 卵母細胞在冷凍過程中的損傷機制
    1.2 冷凍保存的方法
        1.2.1 慢速冷凍法(Slow freezing)
        1.2.2 快速冷凍法(Rapid freezing)
        1.2.3 超快速冷凍法(Ultra rapid freezing)
        1.2.4 玻璃化冷凍(Vitrification)
    1.3 玻璃化冷凍的原理
        1.3.1 玻璃化冷凍的定義
        1.3.2 冷凍保護劑的作用
        1.3.3 玻璃化冷凍保護劑的選擇
        1.3.4 玻璃化冷凍載體的選擇
    1.4 冷凍對卵母細胞結(jié)構(gòu)的損傷
        1.4.1 冷凍對透明帶的損傷
        1.4.2 冷凍對細胞膜的損傷
        1.4.3 冷凍對細胞骨架的損傷
    1.5 豬卵母細胞體外受精的研究
        1.5.1 體外受精技術(shù)的研究進展
        1.5.2 卵丘細胞對卵母細胞的作用
        1.5.3 卵丘細胞對卵母細胞受精及后期發(fā)育能力的影響
        1.5.4 精子的體外獲能
        1.5.5 影響體外受精效果的因素
    1.6 本研究的目的與意義
2 材料方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要儀器設(shè)備與耗材
        2.1.3 主要試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 豬卵母細胞體外成熟
        2.2.2 豬卵母細胞成熟的外部鑒定
        2.2.3 豬卵母細胞的孤雌激活與培養(yǎng)
        2.2.4 豬卵母細胞胞質(zhì)成熟鑒定
        2.2.5 豬卵母細胞的冷凍與解凍
        2.2.6 豬卵母細胞的存活率檢驗
        2.2.7 豬卵母細胞的體外受精
        2.2.8 實驗數(shù)據(jù)分析
    2.3 實驗設(shè)計
        2.3.1 不同冷凍液對卵母細胞的毒性影響
        2.3.2 不同載體對卵母細胞的冷凍效果的影響
        2.3.3 冷凍前后卵母細胞皮質(zhì)顆粒分布的變化
        2.3.4 卵丘細胞對體外受精效果的影響
        2.3.5 冷凍對卵母細胞后期發(fā)育能力的影響
3 結(jié)果與分析
    3.1 不同冷凍液組的毒性對卵母細胞的影響
    3.2 不同冷凍液對卵母細胞冷凍后存活率的影響
    3.3 不同載體冷凍后對細胞存活率的影響
    3.4 冷凍對卵母細胞皮質(zhì)顆粒分布的影響
    3.5 卵丘細胞對卵母細胞的體外受精的影響
    3.6 冷凍對卵母細胞后期發(fā)育能力的影響
4 討論
    4.1 不同冷凍液對卵母細胞的冷凍效果及毒性影響
    4.2 不同載體對卵母細胞冷凍效果的影響
    4.3 冷凍對卵母細胞皮質(zhì)顆粒分布的影響
    4.4 卵丘細胞對卵母細胞的體外受精的影響
    4.5 冷凍對卵母細胞后期發(fā)育能力的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]豬卵母細胞的超低溫冷凍保存及影響其凍后發(fā)育能力的機理研究[D]. 武彩紅.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006

碩士論文
[1]豬MⅡ期卵母細胞玻璃化冷凍的研究[D]. 陸文昊.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[2]卵丘細胞對豬卵母細胞成熟及其發(fā)育能力的影響[D]. 郝元斌.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[3]牛卵母細胞玻璃化冷凍保存的研究[D]. 王義鵬.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[4]豬MII期卵母細胞玻璃化冷凍的研究[D]. 陶志云.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[5]豬卵母細胞玻璃化冷凍及體外成熟的研究[D]. 黃晶.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007



本文編號：3629402