寄生性線蟲在全球范圍內(nèi)廣泛流行,尤其是其中的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲,為嚴(yán)重危害反芻動(dòng)物的寄生性線蟲之一。盡管使用驅(qū)蟲藥能較好地控制此類線蟲,但蟲體的耐藥性問題卻越來越不容忽視。對(duì)于蟲體的耐藥性問題,限于研究方法,目前仍十分缺乏系統(tǒng)的耐藥性現(xiàn)狀和耐藥機(jī)理方面的資料。鑒于此,本研究擬以耐伊維菌素捻轉(zhuǎn)血矛線蟲作研究對(duì)象,在獲得蟲體和蟲卵蛋白的基礎(chǔ)上,對(duì)其中所含蛋白質(zhì)進(jìn)行Shot-gun LC MS/MS分析,以發(fā)現(xiàn)與耐藥性相關(guān)的蛋白,具體結(jié)果如下:（1）捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蟲卵裂解方法的篩選先以糖鹽水漂浮法獲取捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蟲卵,再分別以酶解法、反復(fù)凍融法、強(qiáng)酸強(qiáng)堿液法以及酶解與反復(fù)凍融結(jié)合法裂解蟲卵,然后在鏡下觀察蟲卵結(jié)構(gòu)和計(jì)數(shù)未裂解蟲卵數(shù),并以SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳驗(yàn)證裂解效果。最終確定當(dāng)1mL蟲卵懸液中加入2mL幾丁質(zhì)酶溶液作用45min,再將蟲卵懸液放入液氮中凍存30min,然后取出于50℃水浴6h,反復(fù)3次,蟲卵裂解效果最好,裂解率為93%。（2）捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蟲體裂解方法的篩選對(duì)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲三期幼蟲,分別以液氮研磨法、反復(fù)凍融法、脫鞘后液氮研磨法以及脫鞘后反復(fù)凍融法裂解幼蟲蟲體,結(jié)果顯示脫鞘后液氮... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 家畜線蟲病概述
    1.2 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲概述
        1.2.1 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲簡(jiǎn)介
        1.2.2 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的形態(tài)
        1.2.3 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的生活史
        1.2.4 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲流行病學(xué)概況
        1.2.5 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的防控現(xiàn)狀
    1.3 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的檢測(cè)相關(guān)研究
    1.4 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲耐藥性相關(guān)研究
    1.5 幾丁質(zhì)酶
    1.6 研究的目的與意義
2 研究一 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蟲卵裂解方法研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 蟲卵裂解法優(yōu)化結(jié)果
        2.2.2 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蟲卵蛋白SDS-PAGE凝膠電泳結(jié)果
    2.3 討論與小結(jié)
        2.3.1 討論
        2.3.2 小結(jié)
3 研究二 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲三期幼蟲裂解方法的研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲三期幼蟲裂解方法篩選結(jié)果
        3.2.2 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲三期幼蟲蟲體蛋白的SDS-PAGE電泳結(jié)果
    3.3 討論與小結(jié)
        3.3.1 討論
        3.3.2 小結(jié)
4 研究三 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蛋白質(zhì)的Shotgun LC MS/MS分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
        4.1.3 質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 質(zhì)譜數(shù)據(jù)
        4.2.2 蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果
        4.2.3 共同蛋白鑒定結(jié)果
        4.2.4 差異蛋白鑒定結(jié)果
        4.2.5 GO功能注釋結(jié)果
    4.3 討論與小結(jié)
        4.3.1 討論
        4.3.2 小結(jié)
5 研究四捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蟲體蛋白的Western-blot分析
    5.1 材料與方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 方法
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蟲體蛋白質(zhì)的Western-blot結(jié)果
    5.3 討論與小結(jié)
        5.3.1 討論
        5.3.2 小結(jié)
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[7]捻轉(zhuǎn)血矛線蟲體外培養(yǎng)條件優(yōu)化和H11蛋白提取及氨肽酶活性分析[D]. 趙媛媛.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
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本文編號(hào)：3627897