白介素-18（interleukin-18,IL-18）是白細(xì)胞介素中的一種,因其能夠誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生大量IFN-γ最初被稱為IFN-γ誘生因子。IL-18在增強免疫、抗腫瘤、抗病原微生物感染、抑制病毒活性等方面有著潛在的應(yīng)用前景。γ干擾素（IFN-γ）也稱為免疫干擾素,具有抑制病毒的復(fù)制、抗腫瘤、抗寄生蟲及免疫調(diào)節(jié)等作用。本試驗將pIL-18和pIFN-γ基因分別在乳酸乳球菌表達(dá)系統(tǒng)中分泌表達(dá),對其生物學(xué)活性進(jìn)行檢測,并將pIL-18、pIFN-γ蛋白與豬偽狂犬病活疫苗聯(lián)合使用,分析評價其對疫苗免疫效果的影響。本研究首先通過無菌提取豬脾臟淋巴細(xì)胞總RNA,根據(jù)pIL-18和pIFN-γ基因序列設(shè)計引物,經(jīng)RT-PCR擴增pIL-18和pIFN-γ基因。將pIL-18和pIFN-γ基因與表達(dá)載體pProExHTa連接,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pProExHTa-pIL-18、pProExHTa-pIFN-γ,并轉(zhuǎn)入大腸桿菌,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)pIL-18、pIFN-γ蛋白,SDS-PAGE結(jié)果顯示蛋白表達(dá)。表達(dá)蛋白經(jīng)純化后肌注小鼠,制備出pIL-18、pIFN-γ的抗血清,測得血清效價為1：25600。... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省211工程院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 白介素-18(interleukin-18,IL-18)的研究進(jìn)展
        1.1.1 IL-18的結(jié)構(gòu)特點
        1.1.2 IL-18的受體及信號傳導(dǎo)
        1.1.3 IL-18的生物學(xué)活性
    1.2 γ-干擾素(Interferon-γ,IFN-γ)的研究進(jìn)展
        1.2.1 γ-干擾素的結(jié)構(gòu)特點
        1.2.2 γ干擾素受體及其信號傳導(dǎo)機制
        1.2.3 干擾素的生物學(xué)活性
        1.2.4 γ干擾素的應(yīng)用及發(fā)展前景
    1.3 乳酸乳球菌作為宿主菌表達(dá)外源蛋白的研究進(jìn)展
        1.3.1 乳酸乳球菌的益生作用
        1.3.2 乳酸乳球菌作為表達(dá)載體宿主菌的優(yōu)越性
        1.3.3 乳酸乳球菌作為表達(dá)載體的應(yīng)用
    1.4 研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒與細(xì)胞
        2.1.2 質(zhì)粒、菌種與疫苗
        2.1.3 實驗動物
        2.1.4 引物
        2.1.5 主要試劑
        2.1.6 主要實驗儀器與設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 pIL-18和pIFN-γ基因的獲得
        2.2.2 表達(dá)pIL-18和pIFN-γ重組大腸桿菌的構(gòu)建
        2.2.3 多克隆抗血清的制備
        2.2.4 表達(dá)pIL-18和pIFN-γ重組乳酸乳球菌的構(gòu)建
        2.2.5 重組乳酸乳球菌的誘導(dǎo)表達(dá)及鑒定
        2.2.6 pIL-18和pIFN-γ抗病毒活性的檢測
        2.2.7 pIL-18和pIFN-γ作為免疫佐劑的效果分析
3 結(jié)果
    3.1 目的基因pIL-18和pIFN-γ的獲得
        3.1.1 PCR擴增結(jié)果
        3.1.2 pMD18-T-pIL-18、pMD18-T-pIFN-γ的質(zhì)粒鑒定結(jié)果
    3.2 表達(dá)pIL-18和pIFN-γ重組大腸桿菌的鑒定結(jié)果
    3.3 pIL-18、pIFN-γ在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)果
    3.4 間接ELISA檢測血清抗體效價結(jié)果
    3.5 重組乳酸乳球菌表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建
        3.5.1 重組乳酸乳球菌的鑒定結(jié)果
    3.6 pIL-18和pIFN-γ在重組乳酸乳球菌的表達(dá)及鑒定結(jié)果
        3.6.1 SDS-PAGE結(jié)果
        3.6.2 Western-blot鑒定結(jié)果
    3.7 生物活性檢測結(jié)果
        3.7.1 MTT法檢測抗病毒活性結(jié)果
        3.7.2 血清中特異性抗體IgG的檢測
        3.7.3 脾淋巴細(xì)胞增殖試驗結(jié)果
        3.7.4 細(xì)胞中和試驗結(jié)果
        3.7.5 攻毒保護(hù)試驗結(jié)果
4 討論
    4.1 乳酸乳球菌分泌表達(dá)系統(tǒng)作為遞呈載體的優(yōu)勢
    4.2 豬白介素-18和豬γ-干擾素抗病毒活性的分析
    4.3 豬白介素18和豬γ干擾素對疫苗的免疫增強效應(yīng)分析
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]乳酸菌對腸粘膜免疫調(diào)節(jié)的影響[J]. 趙洪梅,楊金生,楊文濤,楊桂連,王春鳳.  吉林農(nóng)業(yè). 2011(05)
[2]乳酸菌作為基因表達(dá)載體的研究概況[J]. 白蘭芳,戴賢君.  食品研究與開發(fā). 2011(03)
[3]核酸疫苗佐劑的研究進(jìn)展[J]. 余堅,趙飛駿,吳移謀.  微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2010(03)
[4]細(xì)胞因子在疫苗中的免疫增強作用[J]. 羅滿林,唐明森,魯俊鵬.  中國獸藥雜志. 2010(04)
[5]重組人干擾素γ聯(lián)合弓形蟲STAg鼻內(nèi)免疫小鼠的免疫保護(hù)作用[J]. 孟曉麗,弓鴻飛,殷國榮,劉紅麗,王海龍,劉美娜.  中國生物制品學(xué)雜志. 2009(05)
[6]干擾素在治療畜禽病毒性疫病上的應(yīng)用[J]. 鄭仲金,李毅,李鳳榮,高桂明,吳鵬.  當(dāng)代畜牧. 2007(07)
[7]γ干擾素及其在動物疾病防控中的應(yīng)用[J]. 夏倫斌,王新華,連宏軍,薄新文,鐘發(fā)剛.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2007(05)
[8]Mx蛋白研究進(jìn)展[J]. 閆若潛,吳文學(xué),夏春,李新生.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2004(06)
[9]重組雞 γ干擾素的抗球蟲作用[J]. 葉秀華,蔡建平,吳志光,汪明.  中國獸醫(yī)雜志. 2004(07)
[10]腸道屏障功能[J]. 吳國豪.  腸外與腸內(nèi)營養(yǎng). 2004(01)

博士論文
[1]奶牛γ-干擾素基因的表達(dá)及其在乳房炎防治中的初步應(yīng)用[D]. 許金俊.揚州大學(xué) 2004

碩士論文
[1]牛γ干擾素單克隆抗體的制備與抗原捕獲ELISA檢測方法的建立[D]. 張月美.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2009



本文編號：3623421