為研究牛等大型家畜腸道菌群的多樣性及飼草性纖維素分解菌的背景,從東北及內(nèi)蒙牛養(yǎng)殖主產(chǎn)區(qū)和屠宰加工區(qū)環(huán)境中采集大量動物毛發(fā)、糞便、肉樣、血液樣品,共計分離620株纖維化微小菌。對其中200株進(jìn)行了纖維素酶等篩選,共79株具有較為明顯的纖維素酶活性,其中1株從牛糞便中分離的纖維化微小菌（72-3）的初步分析結(jié)果表明,該菌纖維素酶活性較高,具有分泌纖維素酶、蛋白酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、幾丁質(zhì)酶、果膠酶、木聚糖酶等多種酶的能力。經(jīng)基質(zhì)輔助激光解吸飛行時間質(zhì)譜儀MALDI-TOF、法國梅里埃VITEK生化鑒定儀和16S rDNA鑒定,確定為放線菌門中的纖維化微小菌（Cellulosimicrobium sp.nov.）,經(jīng)小鼠急性毒性試驗表明,該株菌具有低致病性,對動物是安全的。藥敏試驗結(jié)果顯示,該菌對24種抗菌藥中的20種耐藥,僅對4種抗生素頭孢哌酮、頭孢曲松、磺胺異惡唑、阿奇霉素敏感。這一研究首次從家畜牛體內(nèi)分離出纖維化微小菌,為家畜腸道內(nèi)菌群多樣性及纖維素消化等研究提供相關(guān)依據(jù),也為后續(xù)纖維化微小菌的相關(guān)酶學(xué)性質(zhì)開發(fā)利用奠定科學(xué)基礎(chǔ)。 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版). 2020,41(05)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

圖1 分離菌株在LB固體培養(yǎng)基上的菌落 形態(tài)(A)和革蘭染色形態(tài)(B)(×1 000)

對分離菌株72-3進(jìn)行了MALDI-TOF MS質(zhì)譜鑒定,結(jié)果見圖2。由表1可知,該菌株能使硝酸還原,且葡萄糖、蔗糖、阿拉伯糖、甘露糖、麥芽糖、D-核糖、纖維二糖、巖藻糖、L-山梨糖、來蘇糖、D-木糖、木糖醇、棉子糖、水楊苷、龍膽二糖、鳥氨酸脫羧酶、β-半乳糖苷酶、N-乙酰-葡萄糖胺、葡萄糖酸鉀、賴氨酸、七葉靈、苦杏仁苷、阿拉伯醇、吲哚試驗反應(yīng)為陽性,精氨酸、脲酶、明膠、產(chǎn)乙酰甲基甲醇、甘露醇、乙二酸、蘋果酸、檸檬酸、苯乙酸、鳥氨酸、山梨醇、鼠李糖、蜜二糖、氧化酶等生化反應(yīng)均為陰性。根據(jù)以上形態(tài)學(xué)觀察、質(zhì)譜鑒定和生化鑒定結(jié)果,初步鑒定該菌為纖維化微小菌屬(Cellulosimicrobiums)細(xì)菌。2.3 產(chǎn)酶活性初步鑒定

2.4 16S rDNA測序和系統(tǒng)發(fā)育分析以分離株72-3的DNA為模板,經(jīng)PCR擴(kuò)增獲得片段大小約1.4 kb的單一條帶(圖4), 與GenBank 中的芬克纖維化微小菌[Cellulosimicrobium funkei strain W6122 (NR-042937.1)] 16S rDNA基因序列同源性為99.57%, 上傳72-3菌株16S rDNA序列到NCBI上得到序列號MN-596021。構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹, 菌株72-3與纖維化微小菌屬 (Cellulosimicrobium) 構(gòu)成一個穩(wěn)定的聚類群, 關(guān)系最近; 其中與已知標(biāo)準(zhǔn)菌株水生纖維化微小菌 (Cellulosimicrobium aquatile strain 3bp) 聚在一個進(jìn)化分支, 兩者序列相似性達(dá)99% (圖5)。結(jié)合菌落形態(tài)、細(xì)菌的蛋白指紋圖、分離株16S rDNA鑒定結(jié)果、分離株生理生化特性,鑒定菌株72-3為纖維菌屬中纖維化微小菌的一個菌株。菌株保藏于中國微生物菌種保藏中心,保藏號為CGMCC No.1.18667。

【參考文獻(xiàn)】：
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