氣腫疽（Clostridiumchauvoei）,病原體為氣腫疽梭菌,反芻動物易感。該病的典型發(fā)病特征為動物肌肉發(fā)生炎性腫脹,觸壓有捻發(fā)音,該病多發(fā)于春夏季天熱多雨的氣候,呈散發(fā)式流行。近年來,牛感染氣腫疽的病例較為多見,這為肉牛經(jīng)濟的發(fā)展乃至整個畜牧業(yè)的生產(chǎn)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。為了針對不同的臨床環(huán)境和檢測需要,對疑似氣腫疽病例進行快速、有效的診斷,在第一時間對疾病的流行和暴發(fā)進行控制。本研究應用4種方法對20例陽性樣本進行檢測。選擇特異性較強的CctA基因作為PCR檢測的目的基因,通過篩選最合適的退火溫度,確定了最適合氣腫疽檢測的PCR檢測方法。將氣腫疽裂解后的菌體作為抗原,并優(yōu)化了 ELISA檢測法中的多種反應條件,進行氣腫疽ELISA檢測。利用抗原、抗體的特性,在免疫層析法的基礎上以氣腫疽膠體金免疫層析試紙條進行氣腫疽的膠體金檢測。通過純化氣腫疽梭菌有效抗原并免疫豚鼠作為一抗用于氣腫疽梭菌雙抗體夾心Dot-ELISA方法的檢測。結果顯示,本試驗成功應用PCR、ELISA、膠體金及Dot-ELISA對氣腫疽進行了臨床檢測,PCR及膠體金檢測方法陽性檢出率較高,檢出率可達100%,... 

【文章來源】：延邊大學吉林省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：36 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．ＰＣＲ方法臨床檢測試驗??Ｆｉｇ．３．?Ｃｌｉｎｉｃａｌ?ｔｅｓｔ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｍｅｔｈｏｄ??

１．２氣腫疸梭菌ＣｃｔＡ基因的擴增??以氣腫疽梭菌ＤＮＡ為模板，以Ｃｌ、Ｃ２為引物進行ＰＣＲ擴增。結果顯示：??可得到大小約為５０１?ｂｐ大小的條帶（如圖２所示）。??１３??

延邊大學碩士學位論文－結果抗體用量的確定??抗體的最低量為２５?ｌｉ?ｇ，單克隆抗體與膠體金的的?ｍｌ。??的臨床檢測??金檢測肝臟病料樣本共２０份，試紙條檢測結果陽性ｆ?ｉ?￥?Ｖ?：?ｃ?Ｊ?Ｓ?１?＾?ｎ?，１?＾?ｉｆＳ?＾?Ｖ??

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]牛氣腫疽CctA基因核酸疫苗的制備及免疫效果評價[D]. 齊強.延邊大學 2017
[2]延邊地區(qū)牛氣腫疽流行病學調(diào)查及CctA基因真核表達載體的構建與表達[D]. 段雪巖.延邊大學 2016
[3]氣腫疽梭菌PCR檢測方法的建立及初步應用[D]. 司唯.延邊大學 2015
[4]延邊株氣腫疽梭菌的分離鑒定及cctA基因的克隆和表達[D]. 云巾宴.延邊大學 2015
[5]氣腫疽梭菌單克隆抗體的制備及膠體金診斷試紙條的研制[D]. 姜丹丹.延邊大學 2013
[6]Dot-ELISA檢測牛D型產(chǎn)氣莢膜梭菌病抗體的研究[D]. 李云霄.延邊大學 2008



本文編號：3609932