綿羊肺炎支原體可引起綿羊及山羊發(fā)生綿羊支原體肺炎,該肺炎是一種非典型肺炎,廣泛分布于世界范圍內(nèi),危害極其嚴重。本試驗旨在通過全菌滅活制備綿羊肺炎支原體滅活疫苗。肉羊養(yǎng)殖場采集有肺炎癥狀羊只的鼻拭子、氣管及肺臟等病料,采用本實驗室自制改良培養(yǎng)基對病料中綿羊肺炎支原體進行分離培養(yǎng)、鑒定。待菌株生長穩(wěn)定后,以1:6、1:10、1:20、1:30、1:40、1:50、1:100、1:200等比例對菌株傳代并進行生長曲線的測定,從Oh接菌開始,每6 h進行一次CFU及CCU測定,匯總數(shù)據(jù)繪制曲線。該結(jié)果確定了綿羊肺炎支原體在實驗室中的最佳傳代比例為1:6或1:20,最高菌量可達1.3×109CFU/mL,最佳收獲時間為接種后120h。收集以1:200傳代后生長132 h左右,生長滴度達109CFU/mL的培養(yǎng)物,洗滌除去培養(yǎng)基成分,此時生長滴度為5×108CFU/mL,對菌液進行滅活,分別加入等比例的氫氧化鋁佐劑和1%的左旋咪唑佐制備綿羊肺炎支原體滅活疫苗。選取10只牧場中健康羊只分別注射這兩種滅活疫苗,通過安全性試驗后,對200只羊進行兩次免疫,并在免疫前采集羊只鼻拭子進行分菌及PCR檢測。首... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 綜述
    1.1 綿羊肺炎支原體的研究進展
        1.1.1 生物學特性
        1.1.2 致病機理
        1.1.3 病理變化
        1.1.4 臨床癥狀
        1.1.5 流行病學調(diào)查
    1.2 診斷
        1.2.1 臨床癥狀診斷
        1.2.2 分離培養(yǎng)
        1.2.3 分子生物學鑒定
        1.2.4 免疫學診斷
    1.3 防治措施
    1.4 綿羊肺炎支原體疫苗的研究進展
    1.5 疫苗制備中佐劑的選擇
        1.5.1 佐劑的主要功能
        1.5.2 疫苗中常用佐劑
        1.5.3 使用中存在問題
    1.6 本研究的目的和意義
2 研究一 綿羊肺炎支原體的分離鑒定
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株來源
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 培養(yǎng)基的制備
        2.2.2 病原菌的分離
        2.2.3 菌落的形態(tài)學鑒定
        2.2.4 抗生素敏感性試驗
        2.2.5 分子生物學的檢測
        2.2.6 菌株的保存與復蘇
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 分菌結(jié)果
        2.3.2 菌落的形態(tài)學鑒定結(jié)果
        2.3.3 抗生素敏感性試驗結(jié)果
        2.3.4 分子生物學的檢測結(jié)果
    2.4 討論
3 研究二 綿羊肺炎支原體的生長曲線測定
    3.1 試驗材料
        3.1.1 菌株及培養(yǎng)基
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 試驗方法
        3.2.1 顏色變化單位(CCU)計數(shù)法
        3.2.2 菌落形成單位(CFU)計數(shù)法
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 菌落形成單位(CFU)計數(shù)結(jié)果
        3.3.2 顏色變化單位(CCU)計數(shù)結(jié)果
    3.4 討論
4 研究三 綿羊肺炎支原體滅活疫苗的制備及免疫效果檢測
    4.1 實驗材料
        4.1.1 試驗動物及菌株
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 試驗步驟
        4.2.1 菌液的擴增
        4.2.2 菌量的測定
        4.2.3 菌液的濃縮
        4.2.4 菌液的滅活
        4.2.5 無菌檢測
    4.3 綿羊肺炎支原體滅活苗的制備
        4.3.1 佐劑的選擇
        4.3.2 滅活疫苗的配制
        4.3.3 滅活疫苗的保存
    4.4 動物試驗
        4.4.1 安全性試驗
        4.4.2 免疫程序
        4.4.3 抗體水平檢測
    4.5 結(jié)果
        4.5.1 安全性試驗結(jié)果
        4.5.2 分菌與PCR結(jié)果
        4.5.3 ELISA結(jié)果
    4.6 討論
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]綿羊肺炎支原體滅活疫苗的研制及免疫效果的評價[D]. 馮廣余.石河子大學 2016
[3]綿羊肺炎支原體內(nèi)蒙古地方株的分離鑒定及交叉反應性的測定[D]. 孫喜安.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2012
[4]綿羊肺炎支原體（Y-98標準株）P30基因真核表達載體構(gòu)建與P30-IFNγ融合蛋白疫苗研制[D]. 張亞寧.河北師范大學 2012
[5]牛支原體生長特性及其致病性研究[D]. 范媛.西南大學 2011
[6]綿羊肺炎支原體的分離、鑒定及部分生物學特性的研究[D]. 陳宏偉.石河子大學 2005



本文編號：3608252