幽門螺桿菌（Helicobacter pylori, H. pylori, Hp）廣泛存在于人類的胃中,是導(dǎo)致慢性胃炎、胃腸潰瘍、胃腺癌等胃腸疾病的主要病原菌,已嚴(yán)重影響著人們的身體健康。盡管國內(nèi)外采用抗生素三聯(lián)、四聯(lián)療法在治療H. pylori引起相關(guān)的胃炎和胃潰瘍等胃腸疾病方面取得了較大成果,但臨床發(fā)現(xiàn)廣譜抗生素的治療導(dǎo)致幽門螺桿菌耐藥菌株不斷出現(xiàn)和治愈后復(fù)發(fā)率居高不下,臨床上將很快進(jìn)入“感染-治愈-復(fù)發(fā)-再治療-耐藥”的惡性循環(huán),不能徹底解決問題。因此希望通過疫苗免疫奶牛使在牛奶中產(chǎn)生高水平的抗幽門螺桿菌抗體,通過口服該抗體,來預(yù)防和治療H. pylori引起的慢性胃炎、胃腸潰瘍等胃腸疾病。因此希望使用安全、高效、使用方便的疫苗來免疫動(dòng)物產(chǎn)生高濃度抗體或用該疫苗免疫動(dòng)物使之對(duì)幽門螺桿菌產(chǎn)生有效的抵抗力。本研究首先選取生產(chǎn)后10天健康、無乳腺疾病和生殖器官疾病、體溫正常的奶牛14頭,隨機(jī)分為兩組：PBS對(duì)照組和幽門螺桿菌全菌蛋白免疫注射組,每組7頭。用濃度為2×1010cfu/mL的幽門螺桿菌（H. polyri）NCTC11637全菌經(jīng)超聲破碎后與等劑量的完全（不完全）弗氏佐劑充... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一部分 幽門螺桿菌疫苗的研究進(jìn)展
    1 幽門螺桿菌的病理損傷機(jī)制
        1.1 幽門螺桿菌的生物學(xué)特性
        1.2 幽門螺桿菌的感染途徑
        1.3 幽門螺桿菌的毒力基因
            1.3.1 幽門螺桿菌尿素酶(urease)
            1.3.2 細(xì)胞毒素相關(guān)抗原(CagA)
            1.3.3 空泡毒素基因(VacA)
            1.3.4 iceA基因
    2 幽門螺桿菌的治療
        2.1 幽門螺桿菌的化學(xué)藥物治療
        2.2 免疫抗體治療幽門螺桿菌
        2.3 影響幽門螺桿菌治療的因素
    3 幽門螺桿菌感染動(dòng)物模型
        3.1 H. pylori類似菌的自然感染情況
        3.2 H. pylori感染的動(dòng)物模型
        3.3 動(dòng)物模型的應(yīng)用
            3.3.1 動(dòng)物模型在抗H. pylori治療方法和療效研究進(jìn)展
            3.3.2 動(dòng)物模型在研究H. pylori致病機(jī)理方面的應(yīng)用
            3.3.3 動(dòng)物模型在研究H. pylori疫苗中的應(yīng)用
    4 幽門螺桿菌疫苗免疫機(jī)制及其研究進(jìn)展
        4.1 幽門螺桿菌自然感染的免疫反應(yīng)
        4.2 幽門螺桿菌疫苗類型的研究進(jìn)展
            4.2.1 全菌蛋白疫苗
            4.2.2 基因工程疫苗
            4.2.3 載體疫苗
        4.3 國內(nèi)外幽門螺桿菌疫苗研究的現(xiàn)狀
    5 研究目的和意義
        5.1 本研究的目的
        5.2 本研究的意義
第二部分 實(shí)驗(yàn)研究
    實(shí)驗(yàn)研究一 幽門螺桿菌全菌蛋白疫苗免疫奶牛
        引言
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株
                1.1.2 試劑
                1.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 方法
                1.2.1 疫苗準(zhǔn)備
                1.2.2 免疫、采樣
                1.2.3 血清/乳汁中IgG檢測
        2 數(shù)據(jù)分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 奶牛的血清中和牛奶中幽門螺桿菌抗體的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律
            3.2 免疫后奶牛身體狀況
        4 討論
            4.1 疫苗的免疫途徑
            4.2 免疫乳的應(yīng)用
    實(shí)驗(yàn)研究二 幽門螺桿菌UreB/CagA雙價(jià)口服減毒沙門氏菌活載體疫苗的構(gòu)建
        引言
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株與質(zhì)粒
                1.1.2 主要試劑
                1.1.3 主要儀器
                1.1.4 主要培養(yǎng)基
            1.2 方法
                1.2.1 幽門螺桿菌的培養(yǎng)
                1.2.2 感受態(tài)細(xì)菌的制備
                1.2.3 引物設(shè)計(jì)及PCR反應(yīng)體系
                1.2.4 目的基因CagA和UreB分別與T載體(pMD-18T)的連接、轉(zhuǎn)化
                1.2.5 轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒提取鑒定
                1.2.6 pYA3493質(zhì)粒提取,酶切
                1.2.7 表達(dá)Hp-UreB和Hp-CagA的重組減毒豬霍亂沙門菌疫苗的建立
                1.2.8 重組蛋白的表達(dá)及鑒定
        2 結(jié)果與分析
            2.1 Hp-UreB和Hp-CagA基因片段的擴(kuò)增
            2.2 酶切鑒定和和PCR鑒定
            2.3 重組蛋白的表達(dá)及鑒定
        3 討論
            3.1 基因的選擇
            3.2 口服疫苗載體的選擇
    實(shí)驗(yàn)研究三 幽門螺桿菌CagA/UreB沙門氏菌活載體疫苗免疫小鼠的研究
        1 材料和方法
            1.1 材料
                1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
                1.1.2 菌株
                1.1.3 主要試劑
                1.1.4 主要儀器
                1.1.5 各種培養(yǎng)基
            1.2 方法
                1.2.1 疫苗準(zhǔn)備
                1.2.2 免疫、采樣
                1.2.3 幽門螺桿菌特異抗體IgG檢測(ELISA)
                1.2.4 組織切片和免疫組化
        2 數(shù)據(jù)分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 血清中抗體分析
            3.2 組織切片和免疫組化
            3.3 不同組織中幽門螺桿菌SS1菌落數(shù)
        4 討論
    實(shí)驗(yàn)四 幽門螺桿菌CagA/UreB真核熒光載體的構(gòu)建及胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1轉(zhuǎn)染的研究
        引言
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株與質(zhì)粒
                1.1.2 主要試劑
                1.1.3 主要儀器
                1.1.4 各種培養(yǎng)基
            1.2 方法
                1.2.1 幽門螺桿菌的培養(yǎng)
                1.2.2 引物設(shè)計(jì)及PCR反應(yīng)體系
                1.2.3 目的基因CagA和UreB分別與T載體(pMD-18T)的連接、轉(zhuǎn)化
                1.2.4 轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒提取鑒定
                1.2.5 質(zhì)粒pEGFP-N1提取、酶切
                1.2.6 表達(dá)Hp-UreB和Hp-CagA的重組質(zhì)粒的構(gòu)建
                1.2.7 質(zhì)粒大量提取
                1.2.8 提純質(zhì)粒轉(zhuǎn)染GES-1細(xì)胞
                1.2.9 細(xì)胞凋亡的檢測
                1.2.10 電鏡觀察
        2 數(shù)據(jù)分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 Hp-UreB和Hp-CagA基因片段的擴(kuò)增
            3.2 UreB與pEGFP-N1連接以及酶切結(jié)果
            3.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            3.4 細(xì)胞凋亡的檢測
            3.5 透射電鏡觀察
        4 討論
第三部分 參考文獻(xiàn)
第四部分 全文結(jié)論和創(chuàng)新點(diǎn)
    結(jié)論
    創(chuàng)新點(diǎn)
附錄Ⅰ 在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
附錄II 參加的學(xué)術(shù)活動(dòng)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]幽門螺桿菌黏附素HpaA蛋白在大腸桿菌中表達(dá)及其免疫保護(hù)作用[J]. 黃學(xué)勇,許汴利,段廣才,范清堂,郗園林.  中國人獸共患病學(xué)報(bào). 2010(06)
[2]含抗幽門螺桿菌特異性抗體牛奶清除效果的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[J]. 李仕英,時(shí)蘭春,王縛鯤,張海譜.  中華醫(yī)院感染學(xué)雜志. 2010(09)
[3]幽門螺桿菌基因組多態(tài)性的研究進(jìn)展[J]. 任莉,郭剛,鄒全明.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào). 2010(04)
[4]含抑制素重組質(zhì)粒的減毒豬霍亂沙門氏菌C500遺傳穩(wěn)定性研究[J]. 甄艷紅,韓麗,梁愛心,王慶玲,楊利國.  生物技術(shù)通報(bào). 2009(S1)
[5]幽門螺桿菌對(duì)胃上皮細(xì)胞間隙連接超微結(jié)構(gòu)的影響(英文)[J]. 徐燦霞,賈燕,楊文斌,鄒惠芳,王芬,沈守榮.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2009(06)
[6]表達(dá)SLTEC保護(hù)性抗原的重組豬霍亂沙門氏菌C500株的構(gòu)建及生物學(xué)特性[J]. 滿曉營,吳斌,羅勇,余騰,趙戰(zhàn)勤,徐引弟,郭愛珍,陳煥春.  微生物學(xué)報(bào). 2009(04)
[7]流式細(xì)胞術(shù)研究細(xì)胞凋亡的方法與技術(shù)[J]. 潘春留,閆雷,娜仁圖娜拉,卿素珠,關(guān)偉軍,馬月輝.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2009(04)
[8]豬霍亂沙門氏菌ΔasdC500株的生物學(xué)特性及作為活疫苗表達(dá)載體的應(yīng)用[J]. 趙戰(zhàn)勤,徐引弟,吳斌,程相朝,李銀聚,湯細(xì)彪,張春杰,陳煥春.  生物工程學(xué)報(bào). 2009(01)
[9]幽門螺桿菌iceA基因型與胃黏膜病變的相關(guān)性[J]. 張彩鳳,夏永華,韓宇,常廷民.  世界華人消化雜志. 2008(20)
[10]新型生長抑素原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)鑒定[J]. 梁愛心,馮細(xì)鋼,韓麗,滑國華,桑雷,劉興斌,劉耘,楊利國.  生物工程學(xué)報(bào). 2008(06)

碩士論文
[1]幽門螺桿菌相關(guān)性胃病保健型免疫乳制品制備的研究[D]. 譚寶.河北醫(yī)科大學(xué) 2007
[2]幽門螺桿菌CagA基因克隆及表達(dá)[D]. 丁力.鄭州大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3608010