嚴(yán)重?zé)釕?yīng)激對(duì)雄性動(dòng)物的生殖功能有明顯的負(fù)面影響。支持細(xì)胞產(chǎn)生的乳酸不僅是生精細(xì)胞最重要的代謝底物,而且還可以增強(qiáng)生精細(xì)胞抗凋亡的能力。因此,乳酸在保護(hù)雄性動(dòng)物免受熱應(yīng)激對(duì)其生殖功能產(chǎn)生的不利影響方面發(fā)揮著重要作用。熱應(yīng)激能增加動(dòng)物機(jī)體的基礎(chǔ)胰島素分泌量,提高胰島素敏感性。PI3K/Akt在胰島素介導(dǎo)的葡萄糖代謝過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。溫和型熱應(yīng)激（以下簡(jiǎn)稱熱應(yīng)激）能增加支持細(xì)胞乳酸的合成和分泌,但熱應(yīng)激是否通過(guò)胰島素介導(dǎo)的PI3K/Akt信號(hào)調(diào)控支持細(xì)胞乳酸合成及分泌目前還不清楚。本實(shí)驗(yàn)以21日齡仔豬的睪丸為實(shí)驗(yàn)材料,建立體外培養(yǎng)的支持細(xì)胞熱應(yīng)激模型。首先,用不同濃度的胰島素（5²00 nM）處理支持細(xì)胞24 h,通過(guò)CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活性,用乳酸測(cè)試試劑盒測(cè)乳酸分泌量,篩選出合適的胰島素濃度作為后續(xù)試驗(yàn)所用濃度。用篩選出的胰島素濃度（100 nM）處理細(xì)胞0³6 h,測(cè)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞分泌的乳酸量,篩選出合適的處理時(shí)間。其次,細(xì)胞熱處理（43℃,30 min）后恢復(fù)2 h,再用100 nM胰島素處理24 h,用定量PCR檢測(cè)INSR、IG... 

【文章來(lái)源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

熱應(yīng)激對(duì)生精細(xì)胞的影響

31圖 4-1 體外培養(yǎng)的支持細(xì)胞及其純度鑒定A.體外培養(yǎng)的支持細(xì)胞（100×）B.支持細(xì)胞純度鑒定（100×）Figue.4-1 Cultured Sertoli cells and cell purity identificationA.Cultured Sertoli cells（100×）B.Cell purity identification（100×）4.2 不同濃度胰島素對(duì)乳酸分泌及細(xì)胞存活率的影響為了明確胰島素對(duì)支持細(xì)胞的作用，本實(shí)驗(yàn)首先用不用濃度（0~200 nM）的胰島素處理支持細(xì)胞相同時(shí)間（24 h），檢測(cè)其對(duì)支持細(xì)胞活性的影響。從圖 4-2A 可以看出0~100 nM 胰島素對(duì)支持細(xì)胞的活性都沒有影響（P>0.05）；當(dāng)胰島素濃度為 200 nM 時(shí)顯著降低了支持細(xì)胞的活性(P<0.05)。與對(duì)照相比，胰島素濃度為 200nM 時(shí)，胰島素處理組支持細(xì)胞的活性降低了 24.7%(P<0.05)。隨后，本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了 0~100 nM 胰島素對(duì)

西南大學(xué)碩士學(xué)位論文支持細(xì)胞分泌的影響。從圖 4-2B 可見，5~100 nM 的胰島素均能顯著增加乳酸的分泌量(P<0.05)，且在此范圍內(nèi)，隨著胰島素濃度的增高，乳酸分泌逐步增加，在 100 nM 時(shí)達(dá)到頂峰，此時(shí)與對(duì)照組相比增加了 133.3%(P<0.01)；當(dāng)胰島素濃度為 200 nM 時(shí)，支持細(xì)胞乳酸分泌有所下降(P<0.01)。綜上結(jié)果，后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇的胰島素處理最適濃度為100 nM。


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