本研究主要探討了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑�；切苊撗跄懰幔╰aurocholate ursodeoxycholic acid, TUDCA）對(duì)黃牛顆粒細(xì)胞增殖,卵母細(xì)胞體外成熟及體外受精（IVF）早期胚胎發(fā)育的影響,并初步研究其作用的分子機(jī)制,以進(jìn)一步完善黃牛卵母細(xì)胞體外成熟及早期胚胎體外培養(yǎng)的體系。本研究分為以下兩部分。第一部分,研究了TUDCA對(duì)黃牛顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress, ERS）相關(guān)基因表達(dá)的影響,并用衣霉素（tunicamycin, TM）構(gòu)建內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑細(xì)胞凋亡模型,探討TUDCA對(duì)TM誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：（1）黃牛顆粒細(xì)胞經(jīng)不同濃度（0、500、1000、1500μmol/L）TUDCA體外培養(yǎng)后其生長(zhǎng)特性及染色體倍性無明顯變化（P>0.05）,但1500μmol/L組的細(xì)胞凋亡率顯著低于Oμmol/L對(duì)照組（P<0.05）；QRT-PCR的結(jié)果顯示,ERS相關(guān)基因Grp78、Ire1、Chop和Bax的表達(dá)隨著TUDCA濃度的增加均呈下調(diào)趨勢(shì),在TUDCA濃度為150... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

-1黃牛顆粒細(xì)胞經(jīng)不同濃度TUDCA處理后的生長(zhǎng)曲線

注：字母不同說明差異顯希a，b，C，d (尸<0.05)Note:data with different letters differ significantly(P<0.05).圖2-1-3 TUDCA對(duì)黃牛顆粒細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基閃表達(dá)影響Figure 2-1-3 Relative expression of ERS related genes in bovine GCs treated by TUDCA3.1.5 TUDCA處理對(duì)顆粒細(xì)胞XBP-l剪接的影響通過RT-PCR法檢測(cè)各濃度處理后的細(xì)胞XBP-丨的mRNA剪接情況。XBP-1引物設(shè)計(jì)時(shí)，上下游引物跨過內(nèi)子26bp剪切段，因此PCR產(chǎn)物分別為無活性的288bp的22

XBP-lu和有活性的262bp的XBP-ls。RT-PCR的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：不同濃度TUDCA處理組均檢測(cè)不到明顯的XBP-ls條帶,表明XBP-1的mRNA剪接變化不明顯I如圖2-1-4所示）。300bp Xbp.lu_P【I Nctin0 100 500 1000 1500圖2-1-4不同濃度TUDCA對(duì)顆粒細(xì)胞XBP-1基因mRNA剪接的影響Figure 2-1-4 Effect of different concentrations of TUDCA on XBP-1 splicing in granulosa cells3.2 TM對(duì)黃牛顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因表達(dá)的影響本實(shí)驗(yàn)中，用不同濃度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑衣霉素（TM)處理黃牛顆粒細(xì)胞，探討TM對(duì)黃牛顆粒細(xì)胞調(diào)亡及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因的表達(dá)情況，建立TM誘導(dǎo)的黃牛顆粒細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞調(diào)亡模型,初步研究?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞調(diào)亡在黃牛顆粒細(xì)胞的作用機(jī)理，為下一步研究黃牛胚胎凋亡提供理論參考。本實(shí)驗(yàn)分為兩部分。3.2.1 TM對(duì)黃牛黃牛顆粒細(xì)胞調(diào)亡旳影響待第3代黃牛顆粒細(xì)胞匯合至70%時(shí)，分別使用不同濃度的TM (0、100、500、1000 ng/ml)處理培養(yǎng)細(xì)胞12h,觀察細(xì)胞形態(tài)的變化，并用TUNEL染色法檢測(cè)細(xì)胞調(diào)亡情況。結(jié)果如圖2-1-5所示：隨著TM濃度的增大，出現(xiàn)漂浮的細(xì)胞增多，漂浮細(xì)胞中

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]水牛卵巢顆粒細(xì)胞的分離培養(yǎng)及凋亡測(cè)定[J]. 高亞可,陸鳳花,馬帆,喬樹葉,陳施蓓,石德順.  中國畜牧獸醫(yī). 2012(10)



本文編號(hào)：3606905