子宮內(nèi)膜炎是導(dǎo)致母豬流產(chǎn),產(chǎn)仔率下降,母豬淘汰率升高的主要原因,給養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失�，F(xiàn)有的子宮內(nèi)膜炎的治療方法還不能達(dá)到理想的治療效果,尋求更為有效的治療母豬子宮炎癥的新方法迫在眉睫。通過(guò)探究LPS誘導(dǎo)的牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞中的炎癥發(fā)生機(jī)制,可以為治療子宮內(nèi)膜炎提供新的思路。然而,LPS誘發(fā)子宮內(nèi)膜炎的分子機(jī)制尚不明確,miRNA是否參與豬子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病過(guò)程還知之甚少。本研究旨在探究miRNA在豬子宮內(nèi)膜炎發(fā)生時(shí)的作用機(jī)制,以找到新的治療豬子宮內(nèi)膜炎的方法。本試驗(yàn)采用6-7月齡的未發(fā)情母豬子宮作為試驗(yàn)材料,利用體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞主要研究以下幾個(gè)問(wèn)題:（1）是否存在新的參與LPS誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的miRNA;（2）差異表達(dá)的miRNA通過(guò)作用于哪個(gè)靶基因作用并調(diào)控炎癥相關(guān)通路;（3）差異表達(dá)的miRNA是否通過(guò)影響炎癥反應(yīng)相關(guān)通路的激活調(diào)節(jié)相關(guān)炎性因子的分泌。本試驗(yàn)在前期預(yù)試驗(yàn)確定LPS劑量的基礎(chǔ)上,用LPS處理子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞,處理結(jié)束后提取RNA進(jìn)行高通量測(cè)序,找出表達(dá)差異顯著的miRNA。將測(cè)序結(jié)果與生物信息分析相結(jié)合,預(yù)測(cè)差異miRNA可能的靶基因。... 

【文章來(lái)源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

cDNA文庫(kù)的構(gòu)建步驟Fig.3-8ConstructionstepsofthecDNAlibrary文庫(kù)構(gòu)建完成后，先使用Qubit2.0進(jìn)行初步定量，稀釋文庫(kù)至1ng/ul，隨后使用Agilent2100對(duì)文庫(kù)的插入片段長(zhǎng)度（insertsize）進(jìn)行檢測(cè)，insertsize符合預(yù)

第 4 章 試驗(yàn)結(jié)果第 4 章 試驗(yàn)結(jié)果4.1 子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與純度鑒定子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞在細(xì)胞瓶中培養(yǎng) 24h 后開(kāi)始貼壁，2 d 后，顯微鏡下細(xì)胞開(kāi)始貼壁。10 d 左右細(xì)胞已經(jīng)鋪滿(mǎn)培養(yǎng)瓶的 60 %左右。純化后再培養(yǎng) 6 d 左右，細(xì)胞已經(jīng)鋪滿(mǎn)培養(yǎng)瓶的 70%，呈鋪路石樣（圖 4-1A）。由于角蛋白細(xì)胞是存在與于上皮細(xì)胞的特異性蛋白，因此，本試驗(yàn)以此蛋白作為標(biāo)志物用于鑒定上皮細(xì)胞。結(jié)果顯示，在一百個(gè)細(xì)胞中，95%以上的細(xì)胞顯示結(jié)果為陽(yáng)性。試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明純化后的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞純度足以滿(mǎn)足下一步試驗(yàn)要求。（圖 4-1B）

西南大學(xué)碩士學(xué)位論文 RNA 完整性檢測(cè)將提取的 RNA 進(jìn)行瓊脂糖檢測(cè)，結(jié)果如圖 4-2 所示，28s，18s，5s 條帶減弱。樣品 RNA 的 A260/280 比值均在 1.8-2.0 之間，說(shuō)明 RNA 純度能續(xù)試驗(yàn)需求。進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組及處理組 RNA 濃度均在 100 ng/ml 之間，對(duì)照組及 LPS 處理組的 RNA 完整值（RIN 值）均為 9.5（表 4所提 RNA 的濃度，純度均滿(mǎn)足建庫(kù)要求，可用于后續(xù)試驗(yàn)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]母豬子宮內(nèi)膜炎的診斷與治療[J]. 孫宏磊.  獸醫(yī)導(dǎo)刊. 2019(03)
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[5]聚焦母豬營(yíng)養(yǎng) 提高繁殖性能——營(yíng)養(yǎng)提升母豬繁殖潛力技術(shù)論壇在廣州召開(kāi)[J]. 彭華,王亞輝,顧紅華.  中國(guó)豬業(yè). 2013(08)
[6]互助八眉豬子宮內(nèi)膜炎病原菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)[J]. 張萬(wàn)元,趙永輝,蔡曉明,喬有成.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2009(11)
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碩士論文
[1]雌激素調(diào)節(jié)豬炎性子宮內(nèi)膜細(xì)胞的分子機(jī)制[D]. 胡玥.西南大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3606134