為探究從靈山土雞分離的攜帶J亞群禽白血病病毒（ALV）U3區(qū)片段的B亞群ALV（ALV-B）毒株GX14FF03的致病性,試驗(yàn)以GX14FF03毒株核酸為模板,采用PCR方法分2段擴(kuò)增病毒的cDNA,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)克隆、酶切后依次連接到pBluescriptⅡKS（+）質(zhì)粒,最終獲得一個(gè)含有ALV-B完整前病毒cDNA的重組質(zhì)粒pBlue-GX14FF03。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DF-1細(xì)胞進(jìn)行病毒拯救,拯救病毒在DF-1細(xì)胞盲傳3代后收集細(xì)胞上清液保存于-80℃,細(xì)胞固定后用于間接免疫熒光檢測(cè)。另取保存細(xì)胞上清進(jìn)行ALV p27抗原檢測(cè)。間接免疫熒光檢測(cè)結(jié)果及ALV p27抗原檢測(cè)結(jié)果全部為陽(yáng)性。拯救病毒及親本病毒接種DF-1細(xì)胞后進(jìn)行體外復(fù)制能力測(cè)定,結(jié)果顯示拯救病毒在1、3、5、7、9 d體外復(fù)制能力與親本病毒基本一致,差異不顯著（P>0.05）。上述結(jié)果表明病毒拯救成功,命名為rGX14FF03。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)家禽. 2020,42(04)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

ALV-B感染性克隆構(gòu)建示意圖

r GX14FF03 IFA鑒定結(jié)果

重組質(zhì)粒經(jīng)NotⅠ和XbaⅠ雙酶切以后，獲得了預(yù)期大小的條帶：長(zhǎng)度為3.8 kb的第一片段，長(zhǎng)度為7.2 kb的pBluescriptⅡKS（+）質(zhì)粒（長(zhǎng)度3.0 kb）+第二片段（長(zhǎng)度4.2 kb）；重組質(zhì)粒經(jīng)XbaⅠ和ClaⅠ雙酶切以后，獲得了預(yù)期大小的條帶：長(zhǎng)度為4.2 kb的第二片段，長(zhǎng)度為6.8 kb的pBluescriptⅡKS（+）質(zhì)粒（長(zhǎng)度3.0 kb）+第一片段（長(zhǎng)度3.8 kb）；重組質(zhì)粒經(jīng)XbaⅠ單酶切以后，獲得了長(zhǎng)度為約11 kb的預(yù)期大小的條帶（見(jiàn)圖2）。2.2 拯救病毒IFA鑒定結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]感染J亞群禽白血病病毒的蛋雞群中檢測(cè)出B亞群禽白血病病毒[J]. 劉功振,張洪海,劉青,邱波,王峰,王曉偉,陳洪博,成子強(qiáng).  病毒學(xué)報(bào). 2009(06)

碩士論文
[1]J亞群白血病病毒NX0101株感染性克隆化病毒的構(gòu)建及其生物學(xué)特性[D]. 張紀(jì)元.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3604941