發(fā)布時間：2022-01-23 18:34

　　為探究從靈山土雞分離的攜帶J亞群禽白血病病毒（ALV）U3區(qū)片段的B亞群ALV（ALV-B）毒株GX14FF03的致病性,試驗以GX14FF03毒株核酸為模板,采用PCR方法分2段擴增病毒的cDNA,PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)克隆、酶切后依次連接到pBluescriptⅡKS（+）質(zhì)粒,最終獲得一個含有ALV-B完整前病毒cDNA的重組質(zhì)粒pBlue-GX14FF03。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DF-1細胞進行病毒拯救,拯救病毒在DF-1細胞盲傳3代后收集細胞上清液保存于-80℃,細胞固定后用于間接免疫熒光檢測。另取保存細胞上清進行ALV p27抗原檢測。間接免疫熒光檢測結(jié)果及ALV p27抗原檢測結(jié)果全部為陽性。拯救病毒及親本病毒接種DF-1細胞后進行體外復制能力測定,結(jié)果顯示拯救病毒在1、3、5、7、9 d體外復制能力與親本病毒基本一致,差異不顯著（P>0.05）。上述結(jié)果表明病毒拯救成功,命名為rGX14FF03。 

【文章來源】：中國家禽. 2020,42(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

ALV-B感染性克隆構(gòu)建示意圖

r GX14FF03 IFA鑒定結(jié)果

重組質(zhì)粒經(jīng)NotⅠ和XbaⅠ雙酶切以后，獲得了預期大小的條帶：長度為3.8 kb的第一片段，長度為7.2 kb的pBluescriptⅡKS（+）質(zhì)粒（長度3.0 kb）+第二片段（長度4.2 kb）；重組質(zhì)粒經(jīng)XbaⅠ和ClaⅠ雙酶切以后，獲得了預期大小的條帶：長度為4.2 kb的第二片段，長度為6.8 kb的pBluescriptⅡKS（+）質(zhì)粒（長度3.0 kb）+第一片段（長度3.8 kb）；重組質(zhì)粒經(jīng)XbaⅠ單酶切以后，獲得了長度為約11 kb的預期大小的條帶（見圖2）。2.2 拯救病毒IFA鑒定結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]禽白血病病毒A亞群分離株感染性克隆的構(gòu)建[J]. 陳雪陽,梁雄燕,方春,顧玉芳,楊玉瑩.  畜牧與獸醫(yī). 2019(08)
[2]地方品種雞禽白血病和雞白痢的危害及凈化防控的實踐[J]. 韋平,崔治中.  中國家禽. 2015(09)
[3]感染J亞群禽白血病病毒的蛋雞群中檢測出B亞群禽白血病病毒[J]. 劉功振,張洪海,劉青,邱波,王峰,王曉偉,陳洪博,成子強.  病毒學報. 2009(06)

碩士論文
[1]J亞群白血病病毒NX0101株感染性克隆化病毒的構(gòu)建及其生物學特性[D]. 張紀元.山東農(nóng)業(yè)大學 2005



本文編號：3604941