發(fā)布時間：2022-01-22 23:45

　　副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis,HPS）是一種存在于豬上呼吸道的條件性致病菌,有15種血清型,其中1、5、12、13和15型毒力較強,且各血清型之間交叉免疫保護現(xiàn)象較差,血清型5、12和13在中國流行較廣,造成了養(yǎng)豬業(yè)巨大的經(jīng)濟損失。豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）主要在肺泡巨噬細胞（PAM）和其它一些單核細胞系中復制,宿主免疫力下降易繼發(fā)性感染豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）、豬瘟病毒（CFSV）、豬鏈球菌、HPS、豬肺炎支原體、胸膜肺炎放線桿菌和沙門氏菌等病原,使患病豬的臨床癥狀加重,死亡率增加。PRRSV感染后繼發(fā)性感染HPS的現(xiàn)象在臨床上非常普遍,但關于PRRSV與HPS共感染的相關研究較少。本課題從疑似HPS感染的發(fā)病豬的心包液和關節(jié)液中分離出一株細菌,經(jīng)測序及血清分型后確定為13型HPS;研究了13型HPS的培養(yǎng)條件及生長曲線,不同劑量的13型HPS感染仔豬的動物模型和PRRSV與HPS共感染對仔豬致病性的影響。主要內(nèi)容及結(jié)果如下:（1）13型HPS... 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學河北省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

型HPS在最適培養(yǎng)基中的相關的生長曲線；A：13型HPS在最適培養(yǎng)基中的生長曲線；B：13型HPS在最適培養(yǎng)基中的活菌對數(shù)值；C：13型HPS的活菌數(shù)與OD600值的關系；C：13型HPS在最適培養(yǎng)基中的pH值

圖 3 重組 pMD-18T 陽性質(zhì)粒的鑒定結(jié)果Fig.3 Identification of recombinant pMD-18T positive plasmidM: DL2000；1：水對照；2-4：重組質(zhì)粒的目的片段（275bp)曲線正確的陽性重組質(zhì)粒經(jīng)紫外分光光度計測定其濃度為 344 ng/μL，然后換算成拷貝1010copies/μL，然后在按 1:10 倍比稀釋成 1×108~1×102copies/μL 的質(zhì)粒標準品繪制標準曲線的模板。~1×102copies/μL 的濃度為標準品的模板進行實時熒光定量 PCR，然后以標準品模為 X 軸，以 Ct 值為 Y 軸建立標準曲線(圖 4）即 Y=-3.4379X + 35.056，R2=0.9931可知：斜率為-3.4379，相關系數(shù)為 0.9931，擴增效率為 100%。

圖 3 重組 pMD-18T 陽性質(zhì)粒的鑒定結(jié)果Fig.3 Identification of recombinant pMD-18T positive plasmidM: DL2000；1：水對照；2-4：重組質(zhì)粒的目的片段（275bp)3.2.1.2 標準曲線上述測序正確的陽性重組質(zhì)粒經(jīng)紫外分光光度計測定其濃度為 344 ng/μL，然后換算成拷貝數(shù)并稀釋至 1×1010copies/μL，然后在按 1:10 倍比稀釋成 1×108~1×102copies/μL 的質(zhì)粒標準品，將此濃度作為繪制標準曲線的模板。以 1×108~1×102copies/μL 的濃度為標準品的模板進行實時熒光定量 PCR，然后以標準品模板拷貝數(shù)對數(shù)為 X 軸，以 Ct 值為 Y 軸建立標準曲線(圖 4）即 Y=-3.4379X + 35.056，R2=0.9931。由此標準曲線可知：斜率為-3.4379，相關系數(shù)為 0.9931，擴增效率為 100%。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]某豬場豬瘟典型病例綜合診斷及病毒E2基因分析[J]. 李焱,馬梓承,劉照虎,王宏宇,孟凡亮,曹龍龍,焦秋林,劉蒙達,李寶全,劉思當.  中國細胞生物學學報. 2019(03)
[2]豬副豬嗜血桿菌病及其綜合防控措施[J]. 高倞.  中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2015(08)
[3]不同培養(yǎng)方式對副豬嗜血桿菌發(fā)酵的影響[J]. 付強,程立坤,苗立中,王艷,沈志強.  中國畜牧獸醫(yī). 2014(10)
[4]副豬嗜血桿菌熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 苗立中,沈志強,韓文瑜.  動物醫(yī)學進展. 2012(11)
[5]副豬嗜血桿菌血清型4液體發(fā)酵培養(yǎng)試驗研究[J]. 林標聲,李曉華,戴愛玲,楊小燕.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2012(09)
[6]副豬嗜血桿菌滅活疫苗對仔豬免疫保護效力的研究[J]. 宋鳳香,陸桂英,肖麗輝,肖毅.  山東畜牧獸醫(yī). 2010(06)
[7]副豬嗜血桿菌感染診斷方法和最新基因分型方法的研究進展[J]. 李艷,劉靜,Alex Olvera,Joaquim Segales.  國外畜牧學(豬與禽). 2008(05)
[8]副豬嗜血桿菌血清5型間接血凝試驗和間接ELISA抗體檢測方法的建立[J]. 石碧,崔耀文,賈凡,金卉,萬云,蔡旭旺,方剛,陳煥春,周銳.  中國獸醫(yī)科學. 2007(11)
[9]PRRSV缺失變異毒株HB-2（sh）/2002在人工感染仔豬組織中的分布與定位[J]. 匡宇,郭鑫,滕可導,楊漢春,陳艷紅,查振林.  中國獸醫(yī)雜志. 2007(03)
[10]副豬嗜血桿菌抗體間接血凝檢測方法的建立及應用[J]. 魏子貢,蔡旭旺,金梅林,胡軍勇,葛君,陳煥春.  中國獸醫(yī)科學. 2006(09)

博士論文
[1]副豬嗜血桿菌感染致炎癥相關信號通路的研究[D]. 陳雨珊.華中農(nóng)業(yè)大學 2016
[2]副豬嗜血桿菌的分離鑒定及診斷方法與滅活疫苗的研究[D]. 蔡旭旺.華中農(nóng)業(yè)大學 2006

碩士論文
[1]屠宰生豬肺臟健康評估及副豬嗜血桿菌的分離鑒定[D]. 馮秀.西北農(nóng)林科技大學 2018
[2]山東省某豬場豬瘟病例的診斷及病毒分離鑒定[D]. 段輝.山東農(nóng)業(yè)大學 2016
[3]副豬嗜血桿菌病重組亞單位疫苗候選抗原蛋白的免疫保護效力評價[D]. 李大鵬.中國農(nóng)業(yè)科學院 2016



本文編號：3603145