背景:新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）屬于副粘病毒科,副粘病毒屬,是一種有包膜的單股負鏈RNA病毒,其包膜上鑲嵌著兩種糖蛋白:血凝素-神經(jīng)氨酸酶（hemagglutinin-neuraminidase,HN）和融合蛋白（fusion protein,F）。F在同源性HN的協(xié)助下對膜融合過程和致病作用起到著至關(guān)重要的作用。NDV F蛋白由553個氨基酸組成,呈三聚體結(jié)構(gòu),分為頭部、莖部、跨膜區(qū)和胞內(nèi)尾部（cytoplasmic tail,CT）。F蛋白為Ⅰ型糖蛋白,起初為無活性的前體F0,在宿主細胞蛋白酶的作用下被裂解活化為F1和F2兩個亞單位,其中F1具有膜融合活性。當前國內(nèi)外有關(guān)NDV F的研究大多集中在胞外區(qū)。關(guān)于其他副粘病毒的研究顯示F的CT對調(diào)節(jié)病毒的入侵以及F的裂解和融合活性起到了重要作用。NDV F蛋白CT由31個氨基酸構(gòu)成。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn),不同副粘病毒之間CT的長度以及氨基酸類型有所不同。研究顯示,將NDVF胞內(nèi)尾部整體缺失后嚴重影響了合胞體的形成。Sergel T等的缺失研究顯示,相比胞內(nèi)尾部前段525-532aa的缺失而言,胞內(nèi)尾部后段... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３突變體蛋白表達效率流式定量檢測結(jié)果??（Ａ）各突變體具代表性的熒光直方圖，ｘ軸為熒光強度，ｙ軸為細胞數(shù)量

?山東大學碩士學位論文???■■■??ｗｔ?Ｆ?ｗｔ?Ｆ＋ＨＮ?Ｇ５４０Ａ＋ＨＮ??■■■??Ｎ５４１Ａ＋ＨＮ?Ｎ５４２Ａ＋ＨＮ?Ｌ５４４Ａ＋ＨＮ??■?■ＨＩ??Ｇ５４５Ａ＋ＨＮ?Ｑ５４６Ａ＋ＨＮ?Ｍ５４７Ａ＋ＨＮ??Ｂ??２５０－｜??Ｚ?２００－?二??工?丨??ｉ?１５０－??｜?１００－?Ｂ?ｊ??１?ＪｌｌｊｌｊＯｌＪｌｌｉｉ??Ｍｕｔａｎｔｓ??圖４突變體蛋白引起的半融合現(xiàn)象（Ａ）與半融合活性定量測定結(jié)果（Ｂ）??（Ａ）?Ｒ１８探針從雞ＲＢＣｓ轉(zhuǎn)移至發(fā)生半融合的ＢＨＫ－２１細胞表面，可通過紅色熒光范圍推??斷半融合情況，白色箭頭指示半融合事件（標尺為３０（＾ｍ）。（Ｂ）半融合活性的定量結(jié)果，??以各突變體熒光強度值減陰性對照值后占野生型的百分比表示。（＊，尸＜０．０５；?＜０．０１；??＊＊＊，／＞?＜０．００１；其它，戶＞０．０５）??Ｆｉｇ?４．?Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ（Ａ）?ａｎｄ?Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ（Ｂ）?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?Ｓｅｍｉ－ｆｕｓｉｏｎ?ａｃｔｉｖｉｔｙ??３９??

容物混合能力大幅上升，為??野生型的２４８．５％（／？＜０．０１），�。蓿担矗窗说膬�(nèi)容物混合能力稍有下降，為野生型的??６２．２％?（Ｐ＜０．０５）?，?Ｎ５４７Ａ則大幅下降，為野生型的１２．６％?（ＰＣ０．００１）。其它??突變體處于野生型Ｆ蛋白的９５．８％？１１９．９％之間，差別無統(tǒng)計學意義（Ｐ＞０．０５）??（圖?５）。??３００１?＊＊??〇）?２?！??１＋２００－?（；?ｊ??｜｜?１?Ｉ??Ｉ?ｉ?１０°－?＿?圓?＿?＿?＊?ｉ?＿??Ｍｕｔａｎｔｓ??圖５突變體蛋白內(nèi)容物混合能力定量測定結(jié)果??以單獨轉(zhuǎn)染ｗｔＦ的Ｊ值為陰性對照，ｗｔＦ與ｗｔＨＮ共轉(zhuǎn)染時的結(jié)果為陽性對照。用陽性對??照及各突變體的Ｊ值減去陰性對照值，將各突變體的數(shù)據(jù)以占陽性對照的百分比表示。結(jié)??果為三次以上獨立實驗數(shù)據(jù)的平均值（＊，尸＜０．０５；?＊＊，Ｐ＜０．０１；?＊＊＊Ｐ＜０．００１）。??Ｆｉｇ?Ｓ．Ｃｏｎｔｅｎｔ?ｍｉｘｉｎｇ?ａｂｉｌｉｔｉｅｓ?ｏｆ?ｗｔ?ａｎｄ?ｍｕｔａｎｔ?Ｆ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ??Ｔｈｅ?ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ?ｖａｌｕｅ?ｏｆ?ｗｔ?Ｆ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ａｌｏｎｅ?ｗａｓ?ｔａｋｅｎ?ａｓ?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ，?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ??ｗｈｅｎ?ｃｏ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｗｔ?Ｆ?ａｎｄ?ｗｔ?ＨＮ?ａｓ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ．?Ｔｈｅ?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｖａｌｕｅ?ｗａｓ??４０??

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3602174