牛傳染性鼻氣管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis virus IBRV）,主要引起牛的一種急性、熱性、接觸性傳染病,主要表現(xiàn)出高熱、呼吸困難、鼻炎和上呼吸道炎癥,給養(yǎng)牛業(yè)帶來極大的經濟損失。牛傳染性鼻氣管炎在歐洲流行迅速很難控制。本試驗的主要目的是以牛傳染性鼻氣管炎ge基因的原核表達產物為抗原建立IBRV抗體間接ELISA檢測方法。通過用生物軟件設計出IBRV gE基因引物序列,隨后用PCR擴增基因,并構建了 Pcold-TF-gE原核表達體系。對重組蛋白gE誘導表達,以上清形式存在。經Westen blot檢測證明重組表達產物能被IBRV標準陽性血清特異識別。以純化鑒定成功的表達產物為抗原以1μg/mL包被酶標板,以HRP兔抗牛為二抗,TMB顯色時間為15min。結果顯示:其臨界值為0.369,特異性試驗表明:該方法與口蹄疫、牛病毒性腹瀉、副結核、布氏桿菌、支原體等陽性血清均無交叉反應。敏感性試驗結果表明:牛陽性血清稀釋比例均達到1:4096表明具有很好的敏感性。通過對5份IBRV陽性血清進行板間和板內試驗結果重復性較好。利用建立的gE-ELI... 

【文章來源】：內蒙古農業(yè)大學內蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：43 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖４?ｇＥ基因ＰＣＲ產物擴増結果??Ｆｉｇｕｒｅ?４?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｇＥ?ｇｅｎｅ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ??

１４?牛傳染性鼻氣管炎病毒ｇＥ蛋白原核表達及間接ＥＬ?ＩＳＡ檢測方法的建立???２．３．２重組質粒的雙酶切鑒定及測序結果??用聚合酶鏈式技術法對鑒定成功的重組質粒進行酶切及測序鑒定得到兩個條??帶分別是５０００ｂｐ和５００ｂｐ的片段。如圖５及圖６所示：??Ｍ?１??％ｚｔ??圖５?ｇＥ重組質粒雙酶切鑒定??Ｆｉｇｕｒｅ?５?Ｄｏｕｂｌｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｇＥ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｌａｓｍｉｄ??Ｍ：?ＤＮＡ分子質量標準；１：?Ｐｃｏｌｄ－ＴＦ－ｇＥ??Ｍ：?Ｔｒａｎｓ５Ｋ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?Ｐｃｏｌｄ－ＴＦ－ｇＥ??＾Ｄｏ?ｗｎｌｏａｄ?ＧｒｇＤ＾ｉｃ＜??Ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ＩＤ：?Ｑｕｅ＾＿１２５９５Ｓ?Ｌｅｎｇｌｆｓ；?１２５７?ｆｉｕｍｂｅｒ?ｏｆ?Ｍａｔｃｈｅｓ：?１??Ｒｏｆｉｇｅ?１：?３６４?ｔｏ?８５７?Ｇｒａｐｈｒｃｓ??（ｉ?ｓ?＾ｘｐｅｃｉ?Ｉｄｅｕｔｉｔｉｅｓ?Ｇａｐｔ?５ｔ？?ｒ，？）ｄ??９１３?ｂｉｔｓ（４９４）?０．０?＾４＾９＾１００°，：］?０：４９－ｖＪ－ｃｊ?Ｐｌｕｓ＾Ｍｍｕｓ??Ｑｕｅｒｙ?１?ＡＣＣＣＣＧＯＧＣＴＣＧＧＣＴＴＣＧＧＴＣＧＡＣＡＣＧＧＴａＴＣＡＣＧ＾ＧＣＧＣＧＣＴＧ＾ＳＣＧＣＧＣＣＣＧＴＣＴＴＴ?６０??Ｑｕｅｒｙ?６１?ＣＴＣＣＣＡＧＧＧＣＣＣＧＣＧＧＣＧＣＧＣＣＣＧＧＡＣＧＴＧＣＧＣＧＣＣＧＴＴＣ３ＣＧ＜５ＣＴＧＧＡＧＣＧＴＣＣＴＣＧＣＣｔ?１２０??Ｑｕｅｒｙ?１２１?ＧＧＣＧＣＣＴＧＣＴＣＧＣＣＧＣＣＣＧＴＧＣＣＣ＾ＡＧＣＣＣＧＴＣＴＧＣＣＴＣＧＡＣＧＡＣＣＯＣＧＡＧＴＧＧＴＴＣ

?內蒙古農業(yè)大學碩士論文?＾５??圖６?ｇＥ基因序列ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ?ｂｌａｓｔ結果??Ｆｉｇｕｒｅ?６?ｇＥ?ｇｅｎｅ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ?ｂｌａｓｔ?ｒｅｓｕｌｔｓ??Ｑｕｅｒｙ：?ｇＥ?基因序列?Ｓｂｊｃｔ：?ｇｅｎＢａｎｋ：?１２５９５９??２．３．３重組蛋白最佳誘導濃度的確定??經檢測當?ＩＰＴＧ?濃度為?０．６ｍｍｏｌ／Ｌ、０．８ｍｍｏｌ／Ｌ、ｌｍｍｏｌ／Ｌ?時，電泳顯示?ｌｍｍｏｌ／Ｌ??濃度時條帶明顯是７０ＫＤａ，而對照處無條帶。如圖７所示：??Ｗｉｌｌ??圖７重組蛋白不同濃度的誘導表達??Ｆｉｇｕｒｅ?７?Ｉｎｄｕｃｅｄ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ａｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ??Ｍ：?Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｑｕａｌｉｔｙ?ｓｔａｎｄａｒｄｓ；?ｌ－４Ｉｎｄｕｃｅｄ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｍｅ：?１?：??Ｐｃｏｌｄ＇ＴＦ／Ｔｒａｎｓｅｔｔａ（ＤＥ３）ｉｎｄｕｃｅｄ?ｗｉｔｈＩＰＴＧ，?２?：?０．６ｍｍｏｌ／Ｌ，?３：?０．８ｍｍｏｌ／Ｌ，?４：?ｌｍｍｏｌ／Ｌ??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]牛傳染性鼻氣管炎病毒SYBR GreenⅠ熒光定量PCR檢測方法的建立及應用[J]. 任亞初,楚會萌,程凱慧,解曉莉,張亮,孫陽陽,楊美,楊宏軍,唐月新,劉文浩,李開榮.  中國預防獸醫(yī)學報. 2019(10)
[2]牛傳染性鼻氣管炎病毒部分gB蛋白的原核表達及抗原性分析[J]. 何小麗,李凡飛,王文佳,張凱,程成,許立華.  江蘇農業(yè)科學. 2019(17)
[3]牛傳染性鼻氣管炎的診治[J]. 姜強.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2019(06)
[4]牛傳染性鼻氣管炎病毒恒溫隔絕式熒光PCR檢測方法的建立[J]. 張穎慧,岳華,湯承,黃建德.  中國預防獸醫(yī)學報. 2019(06)
[5]牛皰疹病毒1型感染性疾病的分析診斷和治療控制措施[J]. 李喆.  飼料博覽. 2019(05)
[6]豬偽狂犬病病毒山東分離株gE和gD基因的克隆及序列分析[J]. 張玲玲,時建立,彭喆,徐勝男,鄭書軒,吳曉燕,徐紹建,王金寶,李俊.  中國獸醫(yī)學報. 2017(11)
[7]牛傳染性鼻氣管炎病毒gB和gE基因雙重熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 徐娜,楊帆,雷宇,李平安,關平原.  中國預防獸醫(yī)學報. 2017(07)
[8]我國牛傳染性鼻氣管炎的流行與防控現(xiàn)狀[J]. 甘瑜萍,余祖瓊,黃恒,曾繁泉,陸俊致.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2016(04)
[9]牛傳染性鼻氣管炎的流行與防控進展[J]. 李程,陳穎鈺,索朗斯珠,郭愛珍.  中國奶牛. 2015(17)
[10]牛傳染性鼻氣管炎病毒gD基因截短表達及其抗血清制備[J]. 張輝,宋玲玲,楊宏軍,王洪梅,武建明,候佩莉,何洪彬,王立群.  家畜生態(tài)學報. 2013(01)

博士論文
[1]IBR間接ELISA的建立及重組gE糖蛋白與單抗的研制[D]. 王海燕.吉林大學 2006

碩士論文
[1]牛傳染性鼻氣管炎病毒gB基因的截短表達與間接ELISA診斷方法的建立[D]. 宋林.東北農業(yè)大學 2015
[2]牛傳染性鼻氣管炎病毒糖蛋白gD單抗制備及其抗原表位鑒定與雙抗夾心ELISA的建立[D]. 周躍輝.中國農業(yè)科學院 2015
[3]牛傳染性鼻氣管炎TK/gE基因缺失重組病毒的研究[D]. 定明.華中農業(yè)大學 2010
[4]IBRV截短gB基因的表達及ELISA診斷方法的建立[D]. 李偉.吉林大學 2009
[5]牛皰疹病毒Ⅰ型重組抗原的制備及間接ELISA方法的建立[D]. 吳春濤.山東農業(yè)大學 2006
[6]牛傳染性鼻氣管炎病毒gB蛋白的分段表達與間接ELISA診斷方法的建立及應用[D]. 李兆利.中國農業(yè)科學院 2006



本文編號：3598673