為了制備抗豬瘟病毒（CSFV）單鏈抗體（scFv）并鑒定其生物學(xué)活性,試驗以編碼特異性抗CSFV scFv基因序列為基礎(chǔ),按照大腸桿菌密碼子偏愛性優(yōu)化并合成scFv基因,將其克隆入pCzn1表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）PlysS感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后進(jìn)行Ni-IDA親和層析純化、SDS-PAGE檢測和Western-blot鑒定,通過間接免疫熒光（IFA）和間接ELISA驗證蛋白抗原的活性。結(jié)果表明:密碼子優(yōu)化合成的抗CSFV scFv基因全長768 bp,在大腸桿菌中主要以包涵體形式表達(dá),其分子質(zhì)量約28.0 ku,Western-blot檢測顯示純化后的目的蛋白能被抗His標(biāo)簽單克隆抗體特異性識別,IFA和ELISA檢測證實純化復(fù)性后的蛋白可與CSFV發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng),且存在明顯的濃度依賴性。說明應(yīng)用原核表達(dá)系統(tǒng)可高效制備抗CSFV scFv。 

【文章來源】：黑龍江畜牧獸醫(yī). 2020,(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒pCzn1-CSFV-scFv的雙酶切鑒定結(jié)果

pCzn1-CSFV-scFv表達(dá)產(chǎn)物的SDS-PAGE分析結(jié)果

表達(dá)產(chǎn)物純化復(fù)性結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗豬瘟病毒單鏈抗體基因的構(gòu)建及其推導(dǎo)的蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)的分子模擬[J]. 劉金鳳,吳健敏,覃紹敏,白安斌,陳鳳蓮,曹穎穎.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2015(04)
[2]豬瘟國內(nèi)外流行情況概述[J]. 欒培賢,肖建華,趙靚,王洪斌.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2013(09)
[3]狂犬病人源二硫鍵穩(wěn)定單鏈抗體融合蛋白的構(gòu)建及活性檢測[J]. 楊瑞梅,楊松濤,王承宇,高玉偉,單虎,夏咸柱.  微生物學(xué)報. 2011(01)
[4]Construction and Expression of a Single Chain Antibody Mimicing Human Ovarian Cancer Antigen CA125[J]. Aidong Li, Zheng Li, Yinghong Wang, Yongming Zhang and Jie Ma Central Laboratory, Cancer Institute and Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences, PUMC, Panjiayuan, Beijing 100021, China; State Key Laboratory of Molecular Oncology, Cancer Institute and Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences, China.  Cellular & Molecular Immunology. 2006(01)
[5]單鏈抗體研究進(jìn)展及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J]. 秦麗莉,張春明.  國外醫(yī)學(xué)(放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)分冊). 2005(06)



本文編號：3598099