羊口瘡病毒（orf virus,ORFV）又稱接觸傳染性膿皰性口炎（contagious secthyma）病毒,屬于痘病毒科副痘病毒屬,主要可感染綿羊和山羊,可引起羔羊的口唇黏膜和肛門部位形成水皰、膿皰和痂皮等,發(fā)病率高死亡率高。2016年12月,安徽肥西某羊場暴發(fā)疑似羊口瘡（Orf）疫情,采集羊病料后,利用原代綿羊睪丸細(xì)胞（Ovis aries testis cell）對其進(jìn)行病毒的分離增殖培養(yǎng),并對病毒的增殖特性進(jìn)行初步鑒定。此外,對2013²017年間流行于安徽省的10株羊口瘡病毒的部分功能基因進(jìn)行了序列分析。為了建立可穩(wěn)定增殖羊口瘡病毒的傳代細(xì)胞系,利用慢病毒包裝系統(tǒng)將人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶亞基（human telomerase reverse transcriptase,hTERT）整合入綿羊睪丸原代細(xì)胞的染色體中,借助于嘌呤霉素的壓力,成功篩選出永生化的綿羊睪丸細(xì)胞系,為后續(xù)羊口瘡病毒的研究奠定了基礎(chǔ)。具體內(nèi)容如下所示。1、羊口瘡病毒AH-FX16株的分離鑒定及生物學(xué)特性研究:首先,分離和鑒定了一株羊口瘡病毒,該發(fā)病羔羊出現(xiàn)口腔黏膜、舌頭、嘴和唇的周圍皮膚... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ORFVVIR基因的PCR擴(kuò)增Fig.2-2AmplicationofORFVVIRgenebyPCR

2 結(jié)果2.1 羊口瘡病毒的分離及鑒定2.1.1 原代綿羊睪丸細(xì)胞的制備綿羊睪丸細(xì)胞經(jīng)胰酶消化傳代培養(yǎng)，以 1/3 分瓶傳代培養(yǎng)至第 10 代，細(xì)胞形態(tài)差異不明顯，均呈纖維狀或者梭形，生長速度仍是 2.5 d~3 d 長滿。細(xì)胞傳代一般 6 h 開始貼壁，36 h 至 60 h 是生長高峰期。1 代10 代

毒分離株的增殖培養(yǎng)及傳代16 株感染 BHK-21 細(xì)胞、MDBK 細(xì)胞、Vero 細(xì)胞法檢測出病毒核酸，結(jié)果如圖 2-3，PCR 結(jié)果說明6 株的增殖培養(yǎng)。分離的原代綿羊睪丸細(xì)胞及其傳毒增殖。ORFV初次感染綿羊睪丸細(xì)胞48 h就可觀現(xiàn)脫落，細(xì)胞間距拉大。傳代至第 5 代細(xì)胞毒感距變大、顆粒物增多的細(xì)胞病變情況。M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]羊口瘡病毒陜西株B2L基因的克隆表達(dá)及間接ELISA檢測方法的建立[D]. 何建斌.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[2]羊口瘡抗體ELISA檢測方法的建立及應(yīng)用[D]. 李杰.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2013



本文編號：3597231