哺乳動(dòng)物長(zhǎng)期暴露于高原環(huán)境中,習(xí)服不良,易在低氧刺激下產(chǎn)生以紅細(xì)胞增多癥為代表的高原病,這也是常駐高原人群中最為常見(jiàn)的慢性疾病。世居高原的牦牛（Bos grunniens）是高海拔低氧環(huán)境中的特有牛種,主要生活于海拔3000-5000米之間,其對(duì)低氧環(huán)境適應(yīng)良好,雖有紅細(xì)胞數(shù)量隨著海拔升高而升高的生理性變化,但未出現(xiàn)紅細(xì)胞增多癥這一代表性高原疾病。在人和小鼠的研究中已發(fā)現(xiàn),促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin,EPO）作為紅細(xì)胞生成調(diào)控的核心因子,在常氧和低氧條件下均受低氧誘導(dǎo)因子-2α（hypoxia induced factor-2α,HIF-2α）的調(diào)控;且其在造血功能之外,在低氧刺激下還表現(xiàn)出多種組織保護(hù)作用。但截止目前,牦牛中EPO的表達(dá)特征及其調(diào)控機(jī)制還未見(jiàn)研究和報(bào)道。因此,本試驗(yàn)首先對(duì)成年牦牛心臟、肝臟、肺臟和腎臟中EPO、HIF-1α和HIF-2α的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè),而后,以其主要生成器官——腎臟為核心,對(duì)其EPO生成細(xì)胞及表達(dá)調(diào)控進(jìn)行研究,具體結(jié)果如下:1.試驗(yàn)使用qRT-PCR和免疫組織化學(xué)方法,對(duì)成年牦牛心臟、肝臟、肺臟和腎臟中EPO、HIF-1α和HIF... 

【文章來(lái)源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁(yè)數(shù)】：100 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

EPO，HIF-1α和HIF-2αmRNA在各組織中的表達(dá)

低氧條件下成年牦牛腎間質(zhì)成纖維樣細(xì)胞中EPO的適應(yīng)性調(diào)控研究33圖1-2成年牦牛心臟中EPO，HIF-1α和HIF-2α的免疫組織化學(xué)染色。陽(yáng)性表達(dá)顯示為棕色。（A-C）EPO在心臟中的定位表達(dá)，可見(jiàn)其心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞浦肯野纖維中均呈陽(yáng)性表達(dá)，圖A和B原始放大倍率：×400，圖C原始放大倍率：×100。（D-F）HIF-1α在心臟中的定位表達(dá)，其表達(dá)位置與EPO一致，圖D和E原始放大倍率：×400，圖F原始放大倍率：×100。（G-H）HIF-2α在心臟中的定位表達(dá)，其表達(dá)位置與HIF-1α的表達(dá)一致，圖G原始放大倍率：×400，圖F原始放大倍率：×100。（I）空白對(duì)照，原始放大倍率：×400。黑色箭頭：血管內(nèi)皮細(xì)胞；三角形：浦肯野纖維。Figure1-2ImmunohistochemicalstainingofEPO,HIF-1α,andHIF-2αinadultyakheart.Positiveexpressionisshownasbrown.(A-C)LocalizationofEPOintheheart,itispositiveincardiomyocytecells,vascularendothelialcellsandpurkinjecells;originalmagnificationofAandB:×400,originalmagnificationofC:×100.(D-F)LocalizationofHIF-1αinthekidney,itsexpressionisthesameasthatofEPO;originalmagnificationofDandE:×400,originalmagnificationofF:×100.(G-H)LocalizationofHIF-2αinthekidney,itsexpressionisconsistentwithHIF-1α;originalmagnificationofG:×400,originalmagnificationofH:×100.(I)Negtivecontrol,originalmagnification:×400.Blackarrow:vascularendothelialcells,blackarrowhead:purkinjecells.2.3成年牦牛肝臟內(nèi)EPO、HIF-1α與HIF-2α的表達(dá)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，在健康牦牛的肝臟中，EPO雖廣泛表達(dá)于肝細(xì)胞

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆博士學(xué)位論文34中，但表達(dá)較弱，其在小葉間膽管中可見(jiàn)明顯的陽(yáng)性表達(dá)，在動(dòng)、靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)呈陰性（圖1-3，A-C）。HIF-1α（圖1-3，D-F）和HIF-2α（圖1-3，G-F）在肝臟內(nèi)的表達(dá)位置與EPO的表達(dá)情況一致，但HIF-1α和HIF-2α的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于EPO，陰性對(duì)照如圖1-3，I所示。圖1-3成年牦牛肝臟中EPO，HIF-1α和HIF-2α的免疫組織化學(xué)染色。陽(yáng)性表達(dá)顯示為棕色。（A-C）EPO在肝臟中的表達(dá)，可見(jiàn)其在肝細(xì)胞和小葉間膽管上皮細(xì)胞的表達(dá)呈陽(yáng)性，在血管內(nèi)皮細(xì)胞不表達(dá)；原始放大倍率：×400。（D-F）HIF-1α在肝臟中的定位表達(dá)，在肝細(xì)胞和小葉間膽管上皮細(xì)胞中的表達(dá)呈陽(yáng)性，血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)呈陰性；原始放大倍率：×400。（G-H）HIF-2α在肝臟中的定位表達(dá)，其表達(dá)位置與HIF-1α一致，表達(dá)強(qiáng)度相對(duì)較弱；原始放大倍率：×400。（I）空白對(duì)照，原始放大倍率：×200。黑色箭頭：小葉間膽管上皮細(xì)胞；紅色箭頭：血管內(nèi)皮細(xì)胞。Figure1-3ImmunohistochemicalstainingofEPO,HIF-1α,andHIF-2αinadultyakliver.Positiveexpressionisshownasbrown.(A-C)LocalizationofEPOintheliver,itispositiveinhepatocyteandinterlobularbileductepithelialcells,negtiveinvascularendothelialcells;originalmagnification:×400.(D-F)LocalizationofHIF-1αintheliver,itsexpressioncouldbedetectedinhepatocyteandinterlobularbileductepithelialcells,andnegtiveinvascularendothelialcells;originalmagnification:×400.(G-H)LocalizationofHIF-2αintheliver,itsexpressionwasconsistentwithHIF-1α,butrelativelyweak;originalmagnification:×400.(I)Negtivecontrol,

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小鼠近端腎小管上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)及鑒定[J]. 王梨名,陳佳,陳客宏,蔡明玉,汪曉月,何婭妮.  生理學(xué)報(bào). 2018(04)
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博士論文
[1]高原習(xí)服及習(xí)服不良過(guò)程中基因表達(dá)特征及其病理生理學(xué)意義研究[D]. 劉寶.第三軍醫(yī)大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3586343